本文選題：口蹄疫病毒 + 3B蛋白�。� 參考：《新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：為了獲得Asia-1口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B的單克隆抗體,以Asia-1型FMDV JS/05毒株RNA為模板,擴(kuò)增3B蛋白基因,并克隆至pET-30a載體,進(jìn)行原核表達(dá)及純化。以Asia-1型口蹄疫病毒、純化的3B蛋白為抗原,免疫4-6周齡的Balb/c雌鼠,經(jīng)過4次免疫后,取其脾細(xì)胞與Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞按5:1進(jìn)行融合,用間接ELISA方法對(duì)融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選,并進(jìn)行4次有限稀釋,陽性細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)后腹腔注射小鼠,制備腹水,并對(duì)制取的腹水進(jìn)行亞型鑒定,反應(yīng)原性和效價(jià)鑒定。將3B蛋白拆分,并構(gòu)建pGEX-4T1載體,融合GST標(biāo)簽表達(dá),通過間接ELISA驗(yàn)證3B抗體的反應(yīng)特性,并通過口蹄疫3ABC檢測(cè)試劑盒篩選臨床陽性和陰性血清,利用本實(shí)驗(yàn)獲得的3B抗體建立競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,用于檢測(cè)臨床樣品中口蹄疫3B蛋白的抗體。結(jié)果表明,獲得一株穩(wěn)定分泌抗口蹄疫病毒3B蛋白的細(xì)胞株,其抗體亞類為IgM,腹水效價(jià)為1:12800,通過Western boltting和間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)鑒定其能識(shí)別口蹄疫病毒3B蛋白。SDS-PAGE結(jié)果表明,成功表達(dá)和純化3B截短融合GST標(biāo)簽的重組蛋白,間接ELISA結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)獲得的抗體和3B1蛋白特異性反應(yīng)。通過口蹄疫3ABC檢測(cè)試劑盒,篩選出臨床4份陽性血清,和4份陰性血清,利用本實(shí)驗(yàn)獲得的3B抗體建立競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,檢測(cè)口蹄疫3B抗體,結(jié)果顯示4份陽性血清顯示出不同程度的抑制率,且具有劑量依賴性,4份陰性血清無抑制作用,無劑量依賴性,表明此競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法和3ABC檢測(cè)方法符合率100%。
[Abstract]:In order to obtain the monoclonal antibody against non-structural protein 3B of Asia-1 foot-and-mouth disease virus (FMDV), the 3B protein gene was amplified from Asia-1 FMDV JS05 strain as template and cloned into pET-30a vector for prokaryotic expression and purification. Asia-1 foot-and-mouth disease virus (FMDV) and purified 3B protein were used as antigen to immunize Balb / c female mice aged 4-6 weeks. After 4 times of immunization, the spleen cells were fused with Sp2 / 0 myeloma cells at 5:1, and the fused cells were screened by indirect Elisa. After 4 times of limited dilution, the positive cells were injected intraperitoneally into mice to prepare ascites, and the subtypes of the ascites were identified, and the reactivity and titer of the ascites were identified. The 3B protein was separated, pGEX-4T1 vector was constructed, the expression of GST tag was fused, the reaction characteristics of 3B antibody were verified by indirect Elisa, and the clinical positive and negative sera were screened by 3ABC detection kit. A competitive Elisa was established using the 3B antibody obtained in this study to detect the antibody against foot-and-mouth disease (FMD) 3B protein in clinical samples. The results showed that a cell line secreting 3B protein of foot-and-mouth disease virus (FMDV) was secreted stably. The antibody subclass was IgM, and the ascites titer was 1: 12800. The results of Western boltting and indirect immunofluorescence assay showed that FMDV 3B protein 路SDS-PAGE could recognize foot-and-mouth disease virus. The recombinant protein of 3B truncated fusion GST tag was successfully expressed and purified. The results of indirect Elisa showed that the antibody and 3B1 protein were specific. Four positive sera and four negative sera were screened by 3ABC test kit of foot-and-mouth disease (FMD). A competitive Elisa method was established by using the 3B antibody obtained in this experiment to detect 3B antibody of foot-and-mouth disease (FMD). The results showed that 4 positive sera showed different inhibition rates, and 4 negative sera had no inhibition and no dose dependence, indicating that the competitive Elisa method and the 3ABC assay were in good agreement with each other.
【學(xué)位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張曉鳳;;口蹄疫病毒的基因分型[J];畜牧與飼料科學(xué)(奶牛版);2006年02期

2 張晉川;;影響口蹄疫病毒轉(zhuǎn)譯起始的因素[J];陜西農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年04期

3 高雪梅;;口蹄疫病毒的致病分子機(jī)制[J];內(nèi)蒙古電大學(xué)刊;2008年01期

4 魏衍全;田宏;吳錦艷;陳妍;尚佑軍;竇永喜;劉湘濤;才學(xué)鵬;;口蹄疫病毒3C基因與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因的真核共表達(dá)[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2011年05期

5 周新虎;剡根強(qiáng);王靜梅;;新疆口蹄疫發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)定量評(píng)估體系研究[J];石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年04期

6 吳亞瓊;高志強(qiáng);吳延功;張鶴曉;喬彩霞;張利峰;單虎;尹燕博;朱淑芬;王慧珊;;亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備研究[J];中國獸醫(yī)雜志;2012年08期

7 孫芳芳;董英;薛強(qiáng);鄒明強(qiáng);;口蹄疫病毒分子生物學(xué)檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年06期

8 蘇衛(wèi),石世匡,徐維佳,王濤,張曉丁,牛紅衛(wèi);應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)口蹄疫病毒的實(shí)驗(yàn)研究[J];病毒學(xué)報(bào);1993年04期

9 洪修默;;口蹄疫與口蹄疫病毒[J];生物學(xué)通報(bào);1993年08期

10 韋平;野生動(dòng)物中的口蹄疫[J];廣西畜牧獸醫(yī);1996年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 段舒怡;姜平;李玉峰;馬蘇;杜以軍;楊曉偉;;O型口蹄疫病毒VP1蛋白單克隆抗體的制備與生物學(xué)特性鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆理事會(huì)第二次會(huì)議暨教學(xué)專業(yè)委員會(huì)第六屆代表大會(huì)論文集[C];2006年

2 劉大貴;羅先惠;;口蹄疫的檢驗(yàn)與防控[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

3 鄒興啟;范運(yùn)峰;張懷宇;鄭明舉;盧受f;張愛民;馬愛榮;趙啟祖;;O型口蹄疫病毒嵌合體的構(gòu)建及病毒拯救[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

4 王雯慧;常惠蕓;黃立軍;馬軍武;林彤;邵軍軍;馬金玲;劉在新;劉湘濤;陳懷濤;謝慶閣;;O型口蹄疫病毒Akesu／58在牛體內(nèi)的定位及其致病機(jī)理的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十四次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專業(yè)委員會(huì)第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

5 魯會(huì)軍;金寧一;鄭敏;韓松;張洪勇;李昌;金擴(kuò)世;;A型口蹄疫病毒多表位基因的表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆理事會(huì)第二次會(huì)議暨教學(xué)專業(yè)委員會(huì)第六屆代表大會(huì)論文集[C];2006年

6 王伊琴;;口蹄疫在口岸中的檢疫及消毒技術(shù)[A];全面建設(shè)小康社會(huì)：中國科技工作者的歷史責(zé)任——中國科協(xié)2003年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上）[C];2003年

7 泰鵬;謝雪岑;孫艷琪;;一種簡(jiǎn)便的澄清口蹄疫病毒懸液的方法[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

8 袁淑珍;高艷華;張燕紅;王麗君;;口蹄疫病毒的克隆[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

9 楊彬;蘭喜;殷相平;李學(xué)瑞;李寶玉;方玉萍;柳紀(jì)省;;口蹄疫病毒雙效疫苗載體的構(gòu)建及其體外表達(dá)研究[A];首屆中國獸藥大會(huì)——獸醫(yī)生物制品學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)學(xué)術(shù)論壇論文集（2008）[C];2008年

10 朱文釧;孔繁德;林祥梅;徐淑菲;吳德峰;韓雪清;吳紹強(qiáng);;口蹄疫檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展與應(yīng)用[A];福建省畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 苗春;口蹄疫包圍中國[N];大眾科技報(bào);2001年

2 本報(bào)記者 劉丁;口蹄疫陰影下的“英國病人”[N];華夏時(shí)報(bào);2007年

3 閆潔;實(shí)驗(yàn)室外泄口蹄疫病毒？英開展調(diào)查[N];新華每日電訊;2007年

4 王星橋;歐盟在口蹄疫恐慌中反思[N];大眾科技報(bào);2001年

5 于維軍;全球畜牧業(yè)仍面臨口蹄疫的威脅[N];中國國門時(shí)報(bào)(中國出入境檢驗(yàn)疫報(bào));2002年

6 劉曄;“山羊絨洗凈因素對(duì)口蹄疫病毒影響”通過鑒定[N];中國國門時(shí)報(bào);2008年

7 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 田增義 研究員;亞洲Ⅰ型口蹄疫[N];中國畜牧獸醫(yī)報(bào);2005年

8 本報(bào)記者 邵文杰;話說口蹄疫[N];光明日?qǐng)?bào);2001年

9 本報(bào)駐蒙古記者 楊濤;口蹄疫蔓延震驚蒙古[N];人民日?qǐng)?bào);2001年

10 李新生 林甘;世界口蹄疫風(fēng)云[N];云南科技報(bào);2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 任林柱;口蹄疫病毒反向遺傳技術(shù)體系及分子標(biāo)記疫苗株的構(gòu)建[D];吉林大學(xué);2007年

2 赫冬梅;豬瘟和口蹄疫病毒抗原基因在植物內(nèi)的重組與表達(dá)[D];浙江大學(xué);2005年

3 陳豪泰;口蹄疫基因工程病毒拯救及其舌下免疫研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

4 馬鈰委;抗口蹄疫病毒轉(zhuǎn)基因豬育種新材料的研究[D];石河子大學(xué);2012年

5 邵軍軍;Asia 1、O型口蹄疫病毒多表位疫苗的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 郭慧琛;O型口蹄疫病毒多基因DNA疫苗的研制[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2004年

7 蔣韜;免疫層析技術(shù)在口蹄疫POCT中的應(yīng)用研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

8 李炯;口蹄疫病毒空衣殼蛋白的表達(dá)加工及其免疫原性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2009年

9 冉波;O型口蹄疫病毒VP1表位重組蛋白疫苗的功能研究[D];吉林大學(xué);2006年

10 崔麗瑾;應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制口蹄疫病毒復(fù)制與感染的研究[D];吉林大學(xué);2008年

，

本文編號(hào)：2085631