本文選題：金黃色葡萄球菌 + 中毒休克綜合征毒素-1��； 參考：《吉林農(nóng)業(yè)大學》2017年碩士論文

【摘要】：奶牛乳腺炎是國內(nèi)外奶牛飼養(yǎng)行業(yè)領(lǐng)域危害嚴重的常見病,金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,下文簡稱金葡菌)是引發(fā)奶牛乳腺炎重要的致病菌之一,流行病學調(diào)查結(jié)果表明金葡菌超抗原毒素可能是誘發(fā)奶牛乳腺炎的重要致病因子。本研究以金葡菌超抗原毒素之一的中毒休克綜合征毒素-1(Toxic Shock Syndrome Toxic 1,TSST-1)為研究對象,開展了如下研究:(1)通過培養(yǎng)表達前期研究中構(gòu)建的基因工程菌,純化制備了融合蛋白GST-rTSST-1,并經(jīng)酶切、親和層析得到重組毒素蛋白rTSST-1,經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測,在rTSST-1相應的分子量(22 kDa)處獲得了單條清晰條帶,成功制備了高純度的目的蛋白。(2)為了探討金葡菌超抗原毒素TSST-1對乳腺的直接致病作用,本研究將產(chǎn)仔3-5 d的母鼠分成5組,經(jīng)乳導管分別給各組小鼠注入5μg、15μg、30μg的重組毒素rTSST-1,并以等體積無菌生理鹽水及自然未感染為陰性對照,于感染后24 h、48 h、72 h剖檢,觀察小鼠乳腺的眼觀炎癥變化。結(jié)果表明,生理鹽水組及自然未感染組,各時相未見肉眼可見炎癥變化;感染后24 h,5μg組與陰性對照組相近無可見變化,乳腺均呈乳白色或乳黃色,15μg組與30μg組注射局部出現(xiàn)紅腫;感染后48 h與72 h,三個劑量試驗組均出現(xiàn)不同于對照組的眼觀變化,乳腺變黃紅或紫紅色、體積萎縮,且隨感染劑量增高病變加重。以感染后24 h乳腺制作組織病理切片,觀察結(jié)果表明,注射生理鹽水的試驗組與自然未感染組的乳腺腺泡形態(tài)完整,未見炎癥細胞浸潤;5μg組乳腺腺泡邊緣完整,但腺泡內(nèi)充滿了浸出液,并可見少量嗜中性白細胞等炎癥細胞浸潤;15μg與30μg組乳腺腺泡形態(tài)邊緣破壞嚴重,腺泡內(nèi)嗜中性粒細胞浸潤數(shù)量明顯增加,整個乳房充滿了炎癥細胞。綜上所述,TSST-1單獨攻毒能引發(fā)乳腺眼觀與組織炎癥性病理變化。(3)為了探討不攜帶毒素基因的金葡菌對乳腺的致病作用,本研究將產(chǎn)仔3-5 d的母鼠分成3組,經(jīng)乳導管分別給各組小鼠注入S.aureus R8(102 CFU)、S.aureus R8(103 CFU)及等體積無菌生理鹽水(陰性對照),于感染后24 h、48 h、72 h剖檢,觀察小鼠乳腺的眼觀炎癥變化。結(jié)果表明,兩個劑量的S.aureus R8菌株感染乳腺后24 h均出現(xiàn)了紅腫變化,48 h、72 h出現(xiàn)了化膿灶、干酪樣壞死,且劑量高的組病變重于低劑量的組。(4)為了探討超抗原毒素TSST-1與金葡菌同時攻毒對乳腺的致病作用,本研究將產(chǎn)仔3-5 d的母鼠分成4組,經(jīng)乳導管分別給小鼠注入rTSST-1(15μg)、rTSST-1(15μg)+S.aureus R8(102 CFU)、S.aureus R8(102 CFU)及等體積無菌生理鹽水(陰性對照),于感染后24 h、48 h、72 h剖檢,觀察小鼠乳腺的眼觀炎癥變化。結(jié)果表明,感染rTSST-1組病變最輕;感染S.aureus R8組的病變最重,而rTSST-1+S.aureus R8組重于rTSST-1組但明顯輕于S.aureus R8組。以感染后24 h乳腺制作組織病理切片,觀察結(jié)果表明,注射生理鹽水的試驗組與自然未感染組的乳腺腺泡形態(tài)完整,未見炎癥細胞浸潤;rTSST-1組與rTSST-1+S.aureus組組織病變相近,乳腺腺泡形態(tài)邊緣不完整,腺泡內(nèi)有大量嗜中性粒細胞浸潤;與前兩組比較,S.aureus組乳腺腺泡形態(tài)邊緣破壞更嚴重,而嗜中性粒細胞等免疫細胞浸潤數(shù)量卻明顯少。進一步于感染后24 h、48 h、72 h檢測了rTSST-1+S.aureus R8和S.aureus R8兩個試驗組乳腺中金葡菌的活菌數(shù),結(jié)果表明在此三個時段S.aureus R8組的活菌數(shù)均顯著高于rTSST-1+S.aureus R8組。此外,分別于12 h、24 h剖檢小鼠檢測了乳腺中TNF-α、IL-18和IL-1β等炎性細胞因子的產(chǎn)生水平,結(jié)果表明攻毒后12 h,各試驗組三種炎性細胞因子產(chǎn)生水平均高于生理鹽水對照組,各組間差異不顯著,但含有毒素的rTSST-1組與rTSST-1+S.aureus組各因子的產(chǎn)生水平有高于金葡菌單獨感染組的趨勢;攻毒后24 h,各實驗組三種炎性因子的產(chǎn)生水平與對照組相比無顯著差別。綜上所述,當超抗原毒素TSST-1在與金葡菌同時感染乳腺時,乳腺的炎癥程度顯著減輕。這一結(jié)果可能是由于TSST-1的超抗原活性激發(fā)了嗜中性粒細胞的大量浸潤,促進了對金葡菌的清除,進而減輕了乳腺的炎癥程度。
[Abstract]:In this study , the fusion protein GST - rTSST - 1 was purified and purified by enzyme digestion and affinity chromatography . The recombinant toxin protein rTSST - 1 was purified by enzyme digestion and affinity chromatography , and a single clear band was obtained at the corresponding molecular weight ( 22 kDa ) of rTSST - 1 . ( 2 ) In order to study the direct pathogenic effects of Staphylococcus aureus superantigen toxin TSST - 1 on mammary gland , 3 - 5 d of female mice were divided into 5 groups . ( 3 ) In order to investigate the pathogenic role of Staphylococcus aureus without toxin gene on mammary gland , 3 - 5 d female mice were divided into 3 groups . S . aureus R8 ( 102 CFU ) , S . aureus R8 ( 103 CFU ) and equal volume sterile physiological saline ( negative control ) were injected into each group of mice after infection . ( 4 ) In order to investigate the pathogenic role of superantigen toxin TSST - 1 and Staphylococcus aureus at the same time , this study was divided into four groups : rTSST - 1 ( 15 渭g ) , rTSST - 1 ( 15 渭g ) + S . aureus R8 ( 102 CFU ) , S . aureus R8 ( 102 CFU ) and S . aureus R8 group . In conclusion , when the superantigen toxin TSST - 1 is infected with Staphylococcus aureus at the same time , the degree of inflammation of the mammary gland is significantly reduced . The result may be that the hyper - antigen activity of the TSST - 1 excites a large number of infiltration of neutrophils , promotes the removal of Staphylococcus aureus , and further reduces the degree of inflammation of the breast .
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S858.23

【參考文獻】

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本文編號：2085129