發(fā)布時間：2018-06-25 10:28

  本文選題：番鴨細小病毒 + 鴨甲肝病毒��； 參考：《廣西大學》2015年碩士論文

【摘要】：番鴨細小病毒病是由番鴨細小病毒(MDPV)引起的引起的主要感染三周齡以內雛番鴨的一種病毒性傳染病,雛鴨感染后可產(chǎn)生腸道卡他性炎癥、拉稀腹瀉、兩腳發(fā)軟等癥狀,嚴重危害了番鴨飼養(yǎng)業(yè)的發(fā)展。目前,番鴨細小病毒病在我國福建、廣東、廣西等主要番鴨飼養(yǎng)區(qū)廣泛流行。鴨甲型病毒性肝炎是由鴨甲肝炎病毒(DHAV)引起的一種傳染性強致死率高的傳染病,主要侵害三周齡以內雛鴨。DHAV根據(jù)血清型分為DHAV-1型、DHAV-2型和DHAV-3型,分別對應于原來的血清Ⅰ型DHV、最早發(fā)現(xiàn)于臺灣的“新型DHV”和最早發(fā)現(xiàn)于韓國的“新型DHV”。隨著我國養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展,鴨肝炎的發(fā)病率和死亡率越來越高,嚴重制約了養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展。近年來,在我國流行的DHAV主要為DHAV-1和DHAV-3。為從分子水平上了解廣西流行株MDPV和DHAV-3的遺傳變化規(guī)律,本研究應用PCR方法擴增了廣西分離株MDPV GX2011-5和DHAV-3GXLZ07的不同核酸片段,對其進行了全基因組序列測定與分析。結果表明,GX2011-5全基因序列與GeneBank公布的其他MDPV株的相似性介于90.5%～94.3%之間,與上海SAAS-SHNH株的相似性最高,與匈牙利FM株的相似性為最低；與鵝細小病毒(Goose Parvovirus, GPV)的相似性介于81.4%～91.4%之間,其中與重慶DY株相似性最高,與匈牙利Virulent B株相似性最低。GXLZ07株全基因序列與DHAV-3其它毒株全基因序列相似性介于95.1～99.3%之間,與福建G株相似性最高,與北京B63株相似性最低。根據(jù)GenBank中鴨甲肝病毒1型(DHAV-1)的3C基因和DHAV-3的VP0基因分別設計了2對特異性引物,并優(yōu)化擴增條件,建立了鑒別DHAV-1和DHAV-3二重二溫式RT-PCR的檢測方法。該方法特異性好,對其他鴨病原體無特異性擴增。該方法的敏感性高,對DHAV-1的核酸最小檢測量為4.9g,對DHAV-3的為7.5ng。應用該方法對53份疑似病料進行檢測,結果DHAV-1 P日性3份,DHAV-3陽性2份,表明建立的方法適用于臨床樣品檢測的應用。根據(jù)GenBank中鴨DHAV-1的3C基因、DHAV-3的VP0基因和MDPV的NS基因分別設計了3對特異性引物,并優(yōu)化擴增條件,建立了DHAV-1V DHAV-3和MDPV多重PCR的檢測方法。該方法特異性好,對其他鴨病原體無特異性擴增。該方法的敏感性高,對DHAV-1的核酸最小檢測量為5.2pg,對DHAV-3的為7.9pg,對MDPV的為5.8pg。應用該方法對53份疑似病料進行檢測,結果DHAV-1陽性3份,DHAV-3陽性2份,MDPV陽性5份,說明該方法很適用于DHAV-1、DHAV-3和MDPV的鑒別和診斷。
[Abstract]:Muscovy duck parvovirus (MDPV) is a kind of viral infection caused by muscovy duck parvovirus (MDPV), which mainly infects young muscovy ducks within three weeks of age. It seriously endangers the development of muscovy duck breeding. At present, muscovy duck parvovirus is prevalent in Fujian, Guangdong and Guangxi. Duck viral hepatitis A (DHAV) is a highly infectious disease caused by duck hepatitis A virus (DHAV), which mainly infects ducklings within three weeks of age. It is divided into two serotypes: DHAV-1, DHAV-2 and DHAV-3. Corresponding to the original serum type I DHVs, the "new DHV" was first found in Taiwan and the "new-type DHV" in Korea. With the development of duck breeding in China, the morbidity and mortality of duck hepatitis are higher and higher, which seriously restricts the development of duck breeding. In recent years, the popular DHAV in China are DHAV-1 and DHAV-3. In order to understand the genetic variation of MDPV and DHAV-3 in Guangxi at molecular level, different nucleic acid fragments of Guangxi isolates MDPV GX2011-5 and DHAV-3GXLZ07 were amplified by PCR, and their whole genome sequence was determined and analyzed. The results showed that the similarity between GX2011-5 gene sequence and other MDPV strains published by GeneBank ranged from 90.5% to 94.3%, the similarity with Shanghai SAAS-SHNH strain was the highest, and the similarity between GX2011-5 gene sequence and Hungarian FM strain was the lowest. The similarity between GPV and Goose Parvovirus (GPV) was between 81.4% and 91.4%, among which, the similarity with DY strain in Chongqing was the highest, and that with virus B strain in Hungary was the lowest. The total gene sequence of GXLZ07 strain was between 95.1and 99.3% with that of DHAV-3 strain. The similarity was the highest with G strain in Fujian and the lowest with B63 strain in Beijing. Two pairs of specific primers were designed according to the 3C gene of DHAV-1 and the VP0 gene of DHAV-3 in GenBank, and the amplification conditions were optimized. A double temperature RT-PCR method was established for the identification of DHAV-1 and DHAV-3. The method has good specificity and has no specific amplification to other duck pathogens. The sensitivity of this method is high, the minimum detection of DHAV-1 nucleic acid is 4.9 g, and that of DHAV-3 is 7.5 ng. This method was used to detect 53 suspected samples. The results showed that 3 DHAV-1 P samples were positive for DHAV-3, which indicated that the established method was suitable for clinical sample detection. According to DHAV-1 3C gene, DHAV-3 VP0 gene and MDPV NS gene in GenBank, three pairs of specific primers were designed, and the amplification conditions were optimized. A method for the detection of DHAV-1V DHAV-3 and MDPV multiplex PCR was established. The method has good specificity and has no specific amplification to other duck pathogens. The sensitivity of this method is high, the minimum detection of nucleic acid for DHAV-1 is 5.2 PG, for DHAV-3 is 7.9 PG, for MDPV is 5.8 PG. 53 suspected samples were detected by this method. The results showed that 3 DHAV-1 positive and 2 DHAV-3 positive cases were MDPV positive, which indicated that this method was suitable for the differential diagnosis and diagnosis of DHAV-1 and DHAV-3 and MDPV.
【學位授予單位】：廣西大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

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本文編號：2065606