本文選題：豬細(xì)小病毒型 + VP基因��； 參考：《生物技術(shù)通報(bào)》2017年03期

【摘要】：旨在研究豬細(xì)小病毒1型(PPV1)VP2蛋白(第155-439位氨基酸)的抗原性,為開(kāi)發(fā)PPV1的檢測(cè)方法奠定基礎(chǔ)。以PPV1型AV31株的DNA為模板,擴(kuò)增獲得849 bp的目的片段,擴(kuò)增產(chǎn)物克隆入p ET30a(+)原核表達(dá)載體,構(gòu)建p ET30aPPV1-VP2(155-439 aa)重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3);在37℃,以1 mmol/L IPTG誘導(dǎo)表達(dá)6 h;采用Ni-NTA樹(shù)脂親和層析純化重組蛋白,并用不同濃度的尿素對(duì)純化蛋白進(jìn)行復(fù)性。SDS-PAGE分析表明,該VP2編碼基因在大腸桿菌中得到表達(dá),蛋白大小約為39 k D;Western blot檢測(cè)結(jié)果表明,該重組蛋白與PPV1陽(yáng)性血清發(fā)生特異性反應(yīng),與NA-PRRSV和PCV2陽(yáng)性血清不發(fā)生交叉反應(yīng)。該實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了PPV1-VP2(155-439 aa)原核表達(dá)載體,實(shí)現(xiàn)了在大腸桿菌中的表達(dá),純化后的復(fù)性蛋白具有較好的反應(yīng)原性。
[Abstract]:The aim of this study was to study the antigenicity of porcine parvovirus type 1 (PPV1) VP2 protein (amino acid at 155-439) and to lay a foundation for the development of detection methods for PPV1. Using the DNA of PPV1 AV31 strain as template, the target fragment of 849 BP was amplified and cloned into prokaryotic expression vector pET30a (). The recombinant plasmid pET30aPPV1-VP2 (155-439aa) was constructed and transferred into E. coli BL21 (DE3) at 37 鈩，

本文編號(hào)：2052894