H7N9亞型AIV熒光定量RT-PCR技術(shù)建立及在活禽市場(chǎng)的應(yīng)用
本文選題:HN亞型流感病毒 + 熒光定量RT-PCR。 參考:《中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年01期
【摘要】:針對(duì)H7N9亞型歐亞譜系A(chǔ)IV的血凝素(HA)基因和神經(jīng)氨酸酶(NA)基因的序列保守區(qū)分別設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan探針。通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了H7N9亞型禽流感病毒實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法。利用該方法對(duì)泰安市活禽市場(chǎng)11個(gè)月的空氣狀況進(jìn)行監(jiān)測(cè)。結(jié)果顯示:H7和N9基因的最低檢測(cè)限度分別為100copies/μL和101 copies/μL,檢測(cè)H7和N9基因的R2值均為0.999。批內(nèi)和批間試驗(yàn)的變異系數(shù)均小于3%。采用該技術(shù),活禽市場(chǎng)空氣樣品3/114份檢測(cè)出H7N9陽(yáng)性。結(jié)果表明:本試驗(yàn)建立的H7N9亞型AIV實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法與其他方法相比具有快速、特異和敏感的優(yōu)點(diǎn),可為H7N9亞型AIV的監(jiān)測(cè)及早期診斷提供理論依據(jù)。
[Abstract]:Specific primers and TaqMan probes were designed for the sequence conserved regions of the H7N9 subtype Eurasian lineage AIV gene and the neuraminidase (NA) gene, respectively. By optimizing the reaction conditions, a real-time quantitative RT-PCR detection method for the H7N9 subtype avian influenza virus was established for 11 months in Tai'an live poultry market. The results showed that the minimum detection limits for H7 and N9 genes were 100copies/ L and 101 copies/ L respectively. The R2 values for the detection of H7 and N9 genes were both in 0.999. batch and in batch test, and the coefficient of variation was less than 3%.. Methods real time fluorescence quantitative AIV RT-PCR compared with the other method is rapid, sensitive and specific, which can provide the theoretical basis for the monitoring and early diagnosis of H7N9 subtype AIV.
【作者單位】: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31470258) 國(guó)家病原微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金項(xiàng)目(SKLPBS1449) 國(guó)家環(huán)境保護(hù)環(huán)境微生物利用與安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室年開(kāi)放基金資助項(xiàng)目(SMARC2013D001)
【分類號(hào)】:S855.3
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本文編號(hào):2045234
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