本文選題：JS雞 + 腫瘤病��； 參考：《山東農(nóng)業(yè)大學》2017年碩士論文

【摘要】：馬立克病(MD)、禽白血病(AL)和網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病(RE)是雞的三大腫瘤病,近年,由于國外品種的引進、品種間的雜交以及家禽業(yè)集約化飼養(yǎng)的不斷發(fā)展,MD、AL和RE的感染情況趨于復雜化,發(fā)病率也越來越高。通過流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn),在國外品種和我國眾多地方品種中,三種腫瘤性疾病存在單一或多重感染的情況。2010年JS雞被上海世博會指定為“安全準入產(chǎn)品”,2013年被評為“省名牌產(chǎn)品”。自2015年以來,對JS雞進行三次疾病的診斷,發(fā)現(xiàn)其在不同日齡特別是產(chǎn)蛋期不斷發(fā)生腫瘤病,腫瘤的頻發(fā)對JS雞的日常生產(chǎn)和種群繁育造成了很大影響。為探討該品種易發(fā)腫瘤病的原因,本研究對送檢疑似發(fā)生腫瘤病的JS雞進行臨床觀察與剖檢,并將病變組織制作病理切片;肝、腎等病變器官混合研磨,研磨液接種CEF進行細胞培養(yǎng),應用間接免疫熒光試驗(IFA)在培養(yǎng)10 d的CEF(期間傳代一次)上檢測REV,細胞上清采用酶聯(lián)免疫吸附反應(ELISA)檢測ALV-p27抗原。提取研磨后固體及細胞培養(yǎng)物的DNA,用針對REV(LTR、env)、ALV(A、B、C、D、E和J亞型的6對引物)以及MDV(meq、132bp,鑒別野毒與疫苗毒)進行PCR檢測。同時從發(fā)病雞群采集病雞血液分離MDV、ALV,對獲得的MDV、ALV進行動物回歸實驗進一步驗證。剖檢發(fā)現(xiàn)JS雞心、肝、腎有白色局灶性或彌漫性腫瘤結(jié)節(jié),初步判定發(fā)生腫瘤病;切片觀察到肝臟發(fā)生淋巴細胞浸潤,心臟有明顯的淋巴細胞瘤,肺臟、腎臟靜脈發(fā)生髓樣細胞增生;PCR檢測研磨液接種CEF進行培養(yǎng)的細胞和組織中的病原,結(jié)果顯示,組織中MDV陽性率為50%(2/4),ALV陽性率為25%(1/4),REV陰性。細胞中ALV陽性率為75%(3/4),REV陰性。測序顯示MDV為野毒,ALV為J亞型;ELISA檢測細胞上清中ALV-p27抗原,陽性率為25%(1/4);IFA檢測REV為陰性。檢測結(jié)果表明,JS雞腫瘤病主要由MDV和ALV-J引起。動物回歸試驗:MDV和ALV-J分離株人工接種1日齡SPF雞,5日齡自血液中分離到MDV和ALV-J,用鑒別引物進行PCR擴增和IFA(鑒別MDV野毒的H19單抗)檢測,并將PCR擴增的片段進行測序。結(jié)果顯示該MDV為野毒株,ALV為J亞型,表明MDV和ALV-J分離株可感染SPF雞,具有完整的生物學活性。本研究從病原學方面對JS雞易發(fā)腫瘤病的原因進行探究,確定了MDV野毒和ALV-J是引發(fā)腫瘤病的病原,這一研究結(jié)果對JS雞腫瘤病的防制提供了科學依據(jù)。
[Abstract]:Marek's disease (MDD), Avian Leukemia (ALL) and reticuloendotheliosis (REE) are the three major oncology diseases in chickens. In recent years, due to the introduction of foreign species, The cross between breeds and the continuous development of intensive breeding in poultry industry the infection of MDL AL and RE tends to be complicated and the incidence of disease is increasing. Through epidemiological investigation, it is found that, among foreign varieties and many local varieties in China, JS chickens were designated as "safe entry products" by the Shanghai World Expo in 2010 and "provincial famous brand products" in 2013. Since 2015, the disease of JS chicken has been diagnosed three times, and it is found that the disease occurs continuously at different ages, especially in laying stage, and the frequent occurrence of tumor has a great influence on the daily production and population breeding of JS chicken. In order to investigate the causes of the disease, the JS chickens suspected to have tumor diseases were observed and dissected, and pathological sections were made, and liver, kidney and other diseased organs were mixed and ground. CEF was inoculated with grinding fluid for cell culture. Indirect immunofluorescence assay (IFA) was used to detect the rev at CEF (once during passage) for 10 days. The supernatant was detected for ALV-p27 antigen by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The DNA of the ground solid and cell cultures was extracted and detected by PCR using 6 pairs of primers for the subtypes of ALVN and J) and MDV meqfen 132bp for identification of wild and vaccine viruses. At the same time, the blood samples were collected from the infected chickens to isolate the MDV and ALV, which were further verified by animal regression test. JS chicken heart, liver and kidney were found to have white focal or diffuse tumor nodules, which were preliminarily diagnosed as oncology, and lymphocytic infiltration was observed in the liver, and obvious lymphocytoma and lung were observed in the heart. Myeloid cell proliferation in renal vein was detected by PCR. The results showed that the positive rate of MDV in the tissue was 50 / 2 / 4 / 4. The positive rate of MDV was 25 / 4 / 4. The positive rate of ALV in cells was 75 / 4 / 4. The results of sequencing showed that MDV was wild virus ALV and ALV was subtype J Elisa to detect ALV-p27 antigen in supernatant. The positive rate of MDV was 25 / 4 / 4 and the REV was negative by IFA. The results showed that MDV and ALV-J were the main causes of JS tumor disease. MDV and ALV-Js were isolated from blood of SPF chickens at 5 days old after inoculation with strain 1: MDV and ALV-J by animal regression test. PCR amplification and IFA (H19 McAb for identification of MDV wild virus) were carried out with identification primers, and the amplified fragments were sequenced. The results showed that the MDV was a wild virus strain ALV was subtype J which indicated that MDV and ALV-J isolates could infect SPF chickens and had complete biological activity. In this study, the etiology of JS chicken oncology was studied, and MDV wild virus and ALV-J were found to be the causative agents of JS chicken oncology. The results provided scientific basis for the prevention and control of JS chicken oncology.
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S858.31

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本文編號：2019862