本文選題：金黃色葡萄球菌 + 奶牛乳腺成纖維細胞��； 參考：《中國獸醫(yī)學報》2017年09期

【摘要】：用熱滅活金黃色葡萄球菌(0,104,105,106,107和108 CFU/mL)刺激奶牛乳腺成纖維細胞,24h后采用Real time-PCR方法檢測TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β1mRNA的表達量,Western blot方法檢測α-SMA、collagen-I及pNF-κB p65蛋白的表達量。使用NF-κB通路抑制劑PDTC預(yù)處理細胞,再用105 CFU/mL熱滅活金黃色葡萄球菌刺激細胞,24h后采用Real time-PCR方法檢測TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β1 mRNA的表達量,Western blot方法檢測α-SMA、collagen-I及p-NF-κB p65蛋白的表達量,免疫熒光法檢測α-SMA及collagen-I蛋白的表達量。結(jié)果顯示,不同濃度熱滅活金黃色葡萄球菌處理細胞的TGF-β1mRNA的表達量顯著升高(P0.05),其中以105 CFU/mL刺激組的TGF-β1mRNA的表達量最高。隨著熱滅活金黃色葡萄球菌濃度的升高,p-NF-κB p65蛋白的表達量逐漸升高(P0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA的表達量也逐漸升高(P0.01)。不同濃度滅活的金黃色葡萄球菌處理細胞的α-SMA及collagen-I蛋白的表達量均能顯著升高(P0.05),其中以105 CFU/mL刺激組的α-SMA及collagen-I蛋白的表達量最高。抑制劑PDTC能夠顯著抑制TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β1 mRNA的表達量(P0.05),PDTC能夠顯著抑制α-SMA、collagen-I及p-NF-κB p65蛋白的表達量(P0.05)。結(jié)果提示,NF-κB信號通路在金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)奶牛乳腺成纖維細胞轉(zhuǎn)分化為肌成纖維細胞過程中發(fā)揮重要作用,本研究為揭示金黃色葡萄球菌性乳腺炎發(fā)生硬化的機制奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:The expression of TNF- 偽, IL-1 尾, IL-6 and TGF- 尾 1 mRNA in bovine mammary fibroblasts were detected by Real time-PCR method. The expressions of 偽 -SMA-collagen-I and pNF- 魏 B p65 protein were detected by Western blot method after stimulation with thermally inactivated Staphylococcus aureus 0104105106107 and 108CFU / mL. The cells were pretreated with NF- 魏 B pathway inhibitor PDTC, and then incubated with 105 CFU / mL heat inactivated Staphylococcus aureus cells for 24 hours. The expression of TNF- 偽 -IL-1 尾 -IL-6 and TGF- 尾 _ 1 mRNA was detected by Real time-PCR method. The expression of 偽 -SMA-collagen-I and p-NF- 魏 B p65 protein was detected by Western blot. The expression of 偽 -SMA and collagen-I protein was detected by immunofluorescence. The results showed that the expression of TGF- 尾 1 mRNA was significantly increased in Staphylococcus aureus cells treated with different concentrations of heat inactivated Staphylococcus aureus, and the expression of TGF- 尾 1 mRNA was the highest in the 105 CFU / mL stimulated group. With the increase of heat inactivated Staphylococcus aureus concentration, the expression of p-NF- 魏 B p65 protein increased gradually. The expression of 偽 -SMA and collagen-I protein in Staphylococcus aureus cells treated with different concentrations of Staphylococcus aureus increased significantly, especially in the 105 CFU / mL stimulated group. The expression of 偽 -SMA and collagen-I protein was the highest in the 105 CFU / mL group. PDTC could significantly inhibit the expression of TNF- 偽, IL-1 尾, IL-6 and TGF- 尾 1 mRNA. PDTC could significantly inhibit the expression of 偽 -SMA-collagen-I and p-NF- 魏 B p65 protein. The results suggest that NF- 魏 B signaling pathway plays an important role in the process of transforming the breast fibroblasts into myofibroblasts induced by Staphylococcus aureus. This study lays a foundation for revealing the mechanism of staphylococcus aureus mastitis sclerosis.
【作者單位】： 黑龍江八一農(nóng)墾大學動物科技學院;
【基金】：黑龍江八一農(nóng)墾大學博士后啟動基金資助項目;黑龍江八一農(nóng)墾大學博士啟動基金資助項目(XYB2013-11)
【分類號】：S858.23

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本文編號：2006973