本文選題：剛地弓形蟲 + Ⅰ型蛋白磷酸酶�。� 參考：《中國獸醫(yī)科學(xué)》2017年08期

【摘要】：為表達(dá)剛地弓形蟲Ⅰ型蛋白磷酸酶(Toxoplasma gondii protein phosphatase 1,Tg PP1)基因、確定Tg PP1在弓形蟲速殖子上的定位,將全基因合成的Tg PP1基因克隆到表達(dá)載體p ET-30a(+)中,構(gòu)建重組載體p ET30a-Tg PP1,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo),利用SDS-PAGE和Westernblot檢測重組蛋白表達(dá)情況及其免疫學(xué)活性。通過親和層析獲得Tg PP1重組蛋白,制備抗血清,采用間接ELISA檢測血清效價、免疫熒光法檢測Tg PP1蛋白在弓形蟲中的定位。結(jié)果顯示,成功構(gòu)建了重組表達(dá)載體p ET30a-Tg PP1并實(shí)現(xiàn)了在大腸桿菌中的表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物的分子質(zhì)量約為36 ku。Western-blot檢測結(jié)果顯示,重組蛋白能與弓形蟲感染小鼠陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng),具有良好的反應(yīng)原性。免疫熒光檢測結(jié)果顯示,Tg PP1主要定位于弓形蟲速殖子頂端。上述結(jié)果為進(jìn)一步研究Tg PP1在弓形蟲入侵和繁殖過程中的作用及其機(jī)制打下了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to express the Toxoplasma gondii type I protein phosphatase (Toxoplasma gondii protein phosphatase 1G PP1) gene and to determine the location of TgPP1 in Toxoplasma gondii Tachyzoites, the TgPP1 gene synthesized by the whole gene was cloned into the expression vector pET-30a (). The recombinant vector pET30a-TgPP1 was constructed and transformed into E. coli BL21DE3) competent cells. The expression and immunological activity of the recombinant protein were detected by SDS-PAGE and Western blot induced by IPTG. The recombinant protein TgPP1 was obtained by affinity chromatography and the antiserum was prepared. The titer of TgPP1 protein was detected by indirect Elisa and the localization of TgPP1 protein in Toxoplasma gondii was detected by immunofluorescence. The results showed that the recombinant expression vector pET30a-TgPP1 was successfully constructed and expressed in Escherichia coli. The molecular weight of the expressed product was about 36 ku.Western-blot. The recombinant protein can react specifically with the positive serum of Toxoplasma gondii infected mice. Immunofluorescence analysis showed that TgPP1 was mainly located at the top of Toxoplasma gondii tachyzoites. These results provide a basis for further study on the role and mechanism of TG PP1 in the invasion and reproduction of Toxoplasma gondii.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部動物產(chǎn)品質(zhì)量安全生物性危害因子風(fēng)險評估實(shí)驗(yàn)室(上海)農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31302083) 國家重點(diǎn)研發(fā)計劃項(xiàng)目(2017YFD0500400) 國家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估重大專項(xiàng)(GJFP201700703) 上海市科委技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)專項(xiàng)(16DZ0501900) 中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)(2016JB13,2017JB03)
【分類號】：S852.7

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6 劉麗霞;玉米根系蛋白磷酸酶基因ZmPP2C功能分析及遺傳轉(zhuǎn)化研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

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5 王君;蛋白磷酸酶5(PP5)對小鼠脂肪代謝及骨發(fā)育的影響[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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9 蔣嵐;蛋白磷酸酶活性測定及其凝膠電泳檢測方法的改進(jìn)[D];重慶大學(xué);2007年

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本文編號：2003229