發(fā)布時(shí)間：2018-06-07 10:03

  本文選題：miR-1704 + 組織表達(dá)　； 參考：《河南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：MicroRNAs是內(nèi)源性的非編碼小RNA分子,通過(guò)結(jié)合到靶基因mRNA的3’UTR,從而在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)調(diào)控基因的表達(dá),參與機(jī)體內(nèi)許多重要的生物過(guò)程。前人在雞胚中發(fā)現(xiàn)mi R-1704,但有關(guān)其功能的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)了mi R-1704在固始雞1日齡、6周齡和16周齡的9種不同組織中的表達(dá)情況;利用TargetScan在線軟件預(yù)測(cè)了miR-1704的靶基因,對(duì)預(yù)測(cè)的靶基因在基因功能注釋數(shù)據(jù)庫(kù)DAVID和GO Term Finder進(jìn)行了GO富集和KEGG通路分析,并通過(guò)雙熒光報(bào)告系統(tǒng)初步鑒定了miR-1704的靶基因;以實(shí)驗(yàn)室固始雞-安卡雞F2代資源群體為試驗(yàn)素材,分析了miR-1704單核苷酸多態(tài)性與資源群體經(jīng)濟(jì)性狀間的關(guān)聯(lián)性,并通過(guò)構(gòu)建miR-1704多態(tài)位點(diǎn)不同等位基因的真核表達(dá)載體對(duì)其功能進(jìn)行了探索。主要結(jié)果如下:1.雞mi R-1704在所檢測(cè)的組織中呈廣泛性表達(dá),且在不同時(shí)期及不同組織間差異性表達(dá)。MiR-1704在1日齡和6周齡時(shí)低豐度表達(dá),在16周齡時(shí)高豐度表達(dá)。1日齡時(shí),miR-1704在腿肌、下丘腦和肝臟中的表達(dá)量較高,在腎臟和大腦中的表達(dá)量較低;6周齡時(shí),miR-1704在各組織中的表達(dá)量均較低;16周齡時(shí),miR-1704在脾臟、腿肌和下丘腦中的表達(dá)量較高,在小腸中的表達(dá)量最低。2.TargetScan預(yù)測(cè)得到miR-1704的靶基因173個(gè)。GO富集和KEGG通路分析結(jié)果表明,miR-1704靶基因顯著富集于基因表達(dá)調(diào)控、生物合成、物質(zhì)代謝、生物過(guò)程調(diào)節(jié)等生物學(xué)過(guò)程,以及細(xì)胞周期、鈣信號(hào)通路和Hedgehog信號(hào)通路。利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證miR-1704與預(yù)測(cè)靶基因BMP2和IRS2的靶標(biāo)關(guān)系,初步證實(shí)BMP2和IRS2是miR-1704的靶基因。3.對(duì)mi R-1704多態(tài)位點(diǎn)rs14668705 CG的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明,該突變與雞出生重、6周體重、8周體重、10周體重、12周體重、4周脛圍、8周脛圍、12周脛圍、屠體重、半凈膛重、腿肌失水率、胸肌p H和谷草轉(zhuǎn)氨酶顯著相關(guān)(P0.05),且除胸肌pH值外,各性狀CC型和GC型個(gè)體表型均值大于GG型。CG位點(diǎn)不同等位基因的表達(dá)研究表明,該突變顯著影響成熟miR-1704的表達(dá)(P0.05)。由以上試驗(yàn)結(jié)果,可得出如下結(jié)論:1.miR-1704在雞不同時(shí)期不同組織中廣泛性、差異性表達(dá)。2.初步證實(shí)BMP2、IRS2是miR-1704的靶基因。3.miR-1704前體區(qū)rs14668705 CG與雞的體重、脛圍、屠體重等性狀顯著相關(guān)(P0.05),CC型個(gè)體表型均值大于GG型,且CG顯著影響成熟miR-1704的生成(P0.05)。
[Abstract]:MicroRNAs is an endogenous non-coding small RNA molecule, which is involved in many important biological processes in the organism by binding to the target gene mRNA and negatively regulating the expression of genes at the post-transcriptional level. Mi R-1704 was found in chicken embryo, but the study on its function has not been reported. In this study, the expression of miR-1704 was detected by fluorescence quantitative PCR in 9 tissues of Gushi chicken at the age of 6 weeks and 16 weeks, and the target gene of miR-1704 was predicted by TargetScan online software. The predicted target genes were enriched by go and analyzed by KEGG pathway in DAVID and GO Term Finder, and the target genes of miR-1704 were preliminarily identified by double fluorescence reporting system. The relationship between miR-1704 single nucleotide polymorphisms and resource population economic traits was analyzed by using F _ 2 resource population of Gushi Chicken and Anka Chicken in laboratory as experimental materials. The function of Eukaryotic expression vector with different alleles of miR-1704 polymorphic loci was explored. The main results are as follows: 1. The expression of miR-1704 was widespread in the tissues examined, and the expression of MiR-1704 was low at 1 day and 6 weeks of age, and 1 day old at 16 weeks old, and miR-1704 in leg muscle at 16 weeks of age. The expression of miR-1704 was higher in the spleen, leg muscle and hypothalamus than in the spleen, leg muscle and hypothalamus at the age of 16 weeks. TargetScan predicted the enrichment of 173 target genes of miR-1704 and the analysis of KEGG pathway. The results showed that the target genes were significantly enriched in biological processes such as gene expression regulation, biosynthesis, substance metabolism, biological process regulation, and so on. And cell cycle, calcium signaling pathway and Hedgehog signaling pathway. Double luciferase reporting system was used to verify the target relationship between miR-1704 and predicted target gene BMP2 and IRS2. It was preliminarily confirmed that BMP2 and IRS2 were the target genes of miR-1704. The results of rs14668705 CG association analysis showed that the mutation was associated with chicken birth weight at 6 weeks and the body weight at 8 weeks and 10 weeks, and the body weight at 12 weeks and 4 weeks, tibia around 8 weeks and tibia around 8 weeks, slaughtering weight, half bore weight, and water loss rate of leg muscle. There was a significant correlation between pH and glutamic oxaloacetic transaminase in pectoralis muscle, and the phenotypic mean values of individuals with CC and GC were higher than those of GG type. CG alleles showed that the mutation significantly affected the expression of mature miR-1704. From the above results, we can draw the following conclusions: 1. The different expression of miR-1704 in different tissues of chicken at different stages. It was preliminarily confirmed that BMP2 / IRS2 was the target gene of miR-1704. 3.miR-1704 rs14668705 CG was significantly correlated with chicken body weight, tibia circumference and slaughter weight. The phenotypic mean of CC type was significantly higher than that of GG type, and CG significantly affected the production of mature miR-1704.
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S831

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本文編號(hào)：1990786