本文選題：禽致病性大腸桿菌 + 空泡轉運毒素　； 參考：《揚州大學》2015年碩士論文

【摘要】：禽致病性大腸桿菌(Avian pathogenic E. coli,APEC)可以導致雞、火雞及其他禽類發(fā)生腸道外疾病,如心包炎、肝周炎、腦膜炎等,甚至引起敗血癥從而急性死亡。7-30日齡雛禽易感,成年家禽亦可發(fā)病。該病發(fā)病率高(3.8%-42.6%)、死亡率高(40%-60%)；極少數(shù)惡劣的環(huán)境可導致極高的死亡率(90.3%),我國禽類養(yǎng)殖業(yè)飽受其害。最近有研究表明,APEC亦可引起人類及哺乳動物發(fā)病,甚至死亡。目前多數(shù)養(yǎng)殖廠主要通過添加大量抗生素防控該病,然而由于半個多世紀廣泛應用抗生素,APEC已經演化出多種血清型的耐藥性菌株,這使得我們承受著巨大的壓力。本研究根據(jù)NCBI公布的序列,分別設計了18對、14對引物用以檢測毒力基因及耐藥基因的分布情況；同時對菌株的藥物敏感性、生物被膜形成能力、致病性及血清型分布進行檢測。毒力基因檢測結果顯示,分離株的fimC、mat、ibeB、yijp及ompA五種毒力基因的檢出率分別為98%、96%、96%、90%、90%為APEC的保守性基因,vat和papC檢出率僅為32%和10%。耐藥基因檢測結果顯示,氨基糖苷類、磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類抗生素的抗性基因strA、strB、dhps、sul Ⅱ及parC檢出率分別為98%、98%、100%、98%及100%,β-內酰胺類抗性基因oxa1、oxa5及oxa31檢出率分別為0%、0%及4%。藥敏試驗結果顯示,所有APEC對四環(huán)素、克林霉素及利福平抗生素100%耐受,對頭孢菌素類的菌必治耐藥性最低僅為16%,對酰胺類的氯霉素耐受率其次為34%；大環(huán)內酯類的紅霉素及阿奇霉素耐藥率分別為90%、82%,喹若酮類的氟哌酸抗生素耐藥率為82%,頭孢菌素類的頭孢噻分耐藥率為84%。APEC分離株的多重耐藥比較嚴重,66%分離株同時耐受10種抗生素,4% APEC分離株耐受本次檢測的所有類型抗生素,表明APEC廣泛耐藥且存在交叉耐藥現(xiàn)象。生物被膜形成能力檢測結果顯示,APEC分離株的生物被膜形成能力均較弱。血清型分型結果顯示,078血清型為主要血清型,該群對10日齡櫻桃谷鴨致病性差異較大；APEC的致病機理在于APEC首先利用黏附相關因子與宿主細胞表面特異性受體結合從而定殖于特定宿主細胞表面,然后通過侵襲相關毒力因子侵襲宿主細胞,繼而進入血液循環(huán)系統(tǒng)擴散至各臟器,并在多種毒力因子的共同參與下導致宿主發(fā)病。空泡轉運毒素(Vacuolating autotransporter toxin, Vat)是APEC的重要毒力因子之一,該蛋白屬于V型分泌系統(tǒng)(T5SS),其可通過其自身的特異性結構直接分泌到膜外。本研究通過采用Red同源重組的方法構建vat缺失株,比較野生株、vat缺失株與互補株在生長特性、凝集沉淀能力、運動性、生物被膜形成能力、致病性等生物學特性的差異。結果表明,該基因能夠抑制APEC泳動能力以及凝集能力,對生物被膜形成、體內存活、致病性具有促進作用,但不影響生長速度、環(huán)境耐受力以及黏附入侵能力。防控禽大腸桿菌病始終堅持防重于治,因此開發(fā)高效、安全的疫苗迫在眉睫。國內研究表明APEC血清型眾多,因此開發(fā)各地區(qū)的主要血清型的多價苗是一個不錯的選擇。我們先前的研究表明江蘇、安徽周邊地區(qū)流行的078血清型約占64%,為主要血清型,其次為02、01血清型,因此對078血清型APEC的滅活苗進行研究。結果表明,選取的078血清型菌株APCE94制備的油乳劑滅活苗對同源血清型強毒株具有很好的保護性,該菌株制備的疫苗以5×108CFU/只免疫雛鴨,僅首免即可提供至少90%的保護率,首免14 d血清效價達到1：400,二免100%保護雛鴨免受078血清型強毒株的感染,二免10d血清效價達到1：1600,但該疫苗對血清01、02型強毒菌株不能提供交叉保護作用。
[Abstract]:Avian pathogenic Escherichia coli (Avian pathogenic E. coli, APEC) can cause intestinal diseases in chickens, turkeys and other birds, such as pericarditis, liver pericarditis, meningitis, and even septicemia, causing acute death of.7-30 days old fowl and adult poultry. The incidence of the disease is high (3.8%-42.6%), high death rate (40%-60%); very few (40%-60%); very few. A number of harsh environments can lead to extremely high mortality (90.3%). China's poultry breeding industry is suffering. Recent studies have shown that APEC can also cause human and mammal disease, even death. At present, most farms mainly use a large number of antibiotics to prevent and control the disease. However, antibiotics are widely used in more than half a century, and APEC has evolved. According to the sequence published by NCBI, 18 pairs were designed and 14 pairs of primers were used to detect the distribution of virulence genes and drug resistance genes, and the drug sensitivity, biofilm ability, pathogenicity and serotype distribution of the strains were detected. The detection of virulence gene showed that the detection rates of five virulence genes of fimC, mat, ibeB, yijp and ompA were 98%, 96%, 96%, 90% and 90%, respectively. The detection rates of VAT and papC were only 32% and 10%. resistance genes, and the resistance genes of aminoglycosides, sulfonamides, quinolones and tetracycline antibiotics, strA, were detected. The detection rates of strB, DHPs, Sul II and parC were 98%, 98%, 100%, 98% and 100% respectively. The beta lactam resistance gene Oxa1, oxa5 and oxa31 detection rates were 0%, 0% and 4%. drug sensitivity tests showed that all APEC tolerance to tetracycline, clindamycin and rifampicin was 100%, and the drug resistance of cephalosporins was only 16%, against amides. The tolerance rate of chloramphenicol was 34%, the resistance rate of erythromycin and azithromycin was 90%, 82%, and 82% of quinolones, and the cephalosporin resistance rate of cephalosporins was more severe in 84%.APEC isolates. 10 antibiotics were tolerated in 66% isolates and 4% APEC isolates were resistant. All types of antibiotics tested by this test showed that APEC was extensively drug-resistant and had cross resistance. The biological membrane formation ability test showed that the biofilm formation ability of APEC isolates was weak. Serotype results showed that 078 serotype was the main serotype, and the group had greater pathogenicity to 10 days old Cherry Valley ducks; APEC The pathogenic mechanism is that APEC first colonized the surface of a specific host cell by binding the adhesion related factors to the surface specific receptor of the host cell, and then invaded the host cell by invading the related virulence factors and then entered the blood circulation system and spread to the organs, and led to the host's hair under the joint involvement of various virulence factors. Vacuolating autotransporter toxin (Vat) is one of the important virulence factors of APEC. The protein belongs to the V secretory system (T5SS), which can be secreted directly to the membrane through its own specific structure. This study constructs a vat deletion strain by using the homologous recombination method of Red to compare the wild strain, VAT deletion and complementation. The results show that the gene can inhibit the APEC swimming ability and agglutination ability, which can promote the formation, survival and pathogenicity of the biofilm, but does not affect the growth rate, environmental tolerance and adhesion. Invasion prevention and control of avian colibacillosis has always persisted in the prevention of weight and the development of efficient and safe vaccines is imminent. Domestic studies have shown that there are many serotypes of APEC. Therefore, it is a good choice to develop the major serotype polyvalent vaccine in various regions. Our previous study showed that the 078 serotypes prevalent in the surrounding areas of Jiangsu and Anhui accounted for about 078 serotypes. 64%, for the main serotype, followed by the 02,01 serotype, the inactivated vaccine of the 078 serotype APEC was studied. The results showed that the selected 078 serotype strain APCE94 prepared by the oil emulsion inactivated vaccine had a good protective effect on the homologous serotype strain. The vaccine prepared by this strain was 5 * 108CFU/ only immunized ducks, only the first exemption could be provided to the vaccine. Less than 90% of the protection rate, the first free 14 d serum titer reached 1:400, two free 100% protected ducks from 078 serotype virulent strains, and two 10d serum titer reached 1:1600, but the vaccine could not provide cross protection to the serotype 01,02 virulent strain.
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.61;S859.797

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 白靜;王宇;;河南省雞致病性大腸桿菌血清型、耐藥性的研究[J];河南農業(yè)科學;2007年10期

2 楊斌;王傳禹;楊向東;;云南省雞致病性大腸桿菌的血清型鑒定及藥敏試驗[J];中國畜牧獸醫(yī)文摘;2010年04期

3 楊增岐;趙余放;李東成;;雞傳染性支氣管炎病毒的血清型及其分型方法[J];國外獸醫(yī)學.畜禽疾病;1996年03期

4 薛世英,袁亞新,薛海辰,李三華,任金卓,王忠;雞大腸桿菌的血清型鑒定[J];河北畜牧獸醫(yī);1997年03期

5 王英珍，黃金海，，丁伯良，鄢明華，張健，巴圖;天津地區(qū)禽多殺性巴氏桿菌分離株血清型鑒定[J];動物科學與動物醫(yī)學;1999年03期

6 徐惠娟;薛云;趙戰(zhàn)勤;陳坤鵬;王樂;鄧雯;;副豬嗜血桿菌國內流行血清型菌株的生物學特性比較研究[J];中國獸醫(yī)學報;2014年05期

7 張燕飛;王東;王玉炯;何玉龍;王建波;蒲建明;丁林軍;扈登強;;寧夏部分地區(qū)雞大腸埃希菌的分離與血清型鑒定[J];動物醫(yī)學進展;2012年05期

8 張靖飛;陜西省肉雞致病性大腸桿菌血清型鑒定和藥敏試驗研究[J];中國動物檢疫;2002年05期

9 陳麗雯;楊正梅;毛家偉;文明;周碧君;;豬胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定[J];動物醫(yī)學進展;2009年07期

10 周雪;付利芝;王孝友;翟少欽;譚榮;丁玉春;;副豬嗜血桿菌的培養(yǎng)及流行血清型鑒定[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2012年11期

相關會議論文 前10條

1 李玲;汪銘書;程安春;于小娜;鐘傳德;陳孝躍;;規(guī)�；B(yǎng)鴨場雛鴨致病性大腸桿菌的分離、血清型鑒定和藥物敏感性檢測及耐藥性分析[A];第三屆第八次全國學術研討會暨動物微生態(tài)企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇論文集[C];2006年

2 馬興樹;朱美霞;王斌;王艷春;米青榮;;河北省南部雞肝周炎大腸桿菌的分離及血清型鑒定[A];京津冀畜牧獸醫(yī)科技創(chuàng)新交流會暨新思想、新觀點、新方法論壇論文集[C];2008年

3 黃金海;丁伯良;王英珍;鄢明華;張健;白鵬勛;;天津地區(qū)雞傳染性支氣管炎病毒的血清型鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學會分會第十次學術研討會論文集[C];2000年

4 程安春;汪銘書;陳孝躍;朱德康;黃城;劉菲;周毅;郭宇飛;劉兆宇;方鵬飛;;我國鴨疫里墨氏桿菌血清型調查及新血清型的發(fā)現(xiàn)和病原特性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物微生態(tài)學分會第三屆第七次學術研討會論文集[C];2004年

5 華炯鋼;李雙茂;云濤;倪征;余斌;陳柳;;浙江上虞地區(qū)鴨疫里默氏桿菌血清型鑒定及藥敏試驗[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十五次學術研討會論文集[C];2010年

6 劉聚祥;李宏娟;陳立功;高振同;李政萍;董世山;;我國部分地區(qū)雞致病性大腸桿菌耐藥性分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)藥理毒理學分會第九次學術討論會論文與摘要集[C];2006年

7 李莎莎;孫亞妮;孫惠;辛英豪;朱巖麗;謝之景;姜世金;;山東省禽源致病性大腸桿菌血清型鑒定及喹諾酮類藥物耐藥性檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十五次學術研討會論文集[C];2010年

8 陶勇;王紅寧;劉書亮;;四川規(guī)�；u場雞致病性E.coli血清型、耐藥性和質粒圖譜的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學會分會第十次學術研討會論文集[C];2000年

9 陳本龍;崔治中;刁有祥;姜世金;;豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌參考株抗血清的制備及野毒株血清型鑒定[A];第一屆中國養(yǎng)豬生產和疾病控制技術大會——2005中國畜牧獸醫(yī)學會學術年會論文集[C];2005年

10 王秀梅;蔣紅霞;廖曉萍;朱恒乾;張悅;劉雅紅;;臨床分離豬源大腸桿菌血清型,毒力基因及抗菌藥耐藥性的調查[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)藥理毒理學分會第十次研討會論文摘要集[C];2009年

相關博士學位論文 前2條

1 吳麗娟;新型多重熒光探針法檢測常見肺炎鏈球菌血清型的臨床應用研究[D];南方醫(yī)科大學;2014年

2 刁有祥;豬胸膜肺炎放線桿菌分子流行病學研究[D];山東農業(yè)大學;2005年

相關碩士學位論文 前10條

1 陳華美;血清型1，2，6，7胸膜肺炎放線桿菌多重PCR檢測方法的建立及應用[D];四川農業(yè)大學;2006年

2 陶勇;四川雞源致病性大腸桿菌血清型鑒定及質粒DNA分析[D];四川農業(yè)大學;2001年

3 張寧;雞傳染性支氣管炎病毒不同血清型交互免疫試驗研究[D];河南農業(yè)大學;2010年

4 趙益超;空泡形成毒素的生物學特性分析及078血清型禽大腸桿菌病疫苗的研制[D];揚州大學;2015年

5 于阿芳;雞致病性大腸桿菌的藥敏試驗、血清型鑒定及耐藥基因的PCR檢測[D];山東農業(yè)大學;2009年

6 馮國亮;雞致病性大腸桿菌血清型分離、鑒定及消毒液篩選[D];山西農業(yè)大學;2013年

7 李曉艷;表達兩種不同血清型的鴨大腸桿菌融合株的構建及其免疫原性的研究[D];四川農業(yè)大學;2011年

8 范君文;東北地區(qū)鹿源性大腸桿菌的血清型、耐藥性和毒力因子分析[D];吉林大學;2008年

9 韓偉;臨床分離雞源性大腸桿菌分型及其耐藥性檢測和質粒DNA分析[D];河北農業(yè)大學;2006年

10 李剛;鄒平地區(qū)鴨源大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性檢測[D];山東農業(yè)大學;2010年

本文編號：1983762