本文選題：產(chǎn)氣莢膜梭菌 + 外毒素cpa��； 參考：《黑龍江畜牧獸醫(yī)》2017年01期

【摘要】：為了建立一種雙重?zé)晒舛縋CR方法檢測腸毒素cpe陽性的產(chǎn)氣莢膜梭菌,試驗(yàn)通過對部分發(fā)表在NCBI中的產(chǎn)氣莢膜梭菌序列進(jìn)行比對,找到其α毒素和腸毒素cpe相對保守的序列,根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)合成2對引物和1對探針,以構(gòu)建的含有α毒素和cpe序列的克隆載體作為標(biāo)準(zhǔn)品,進(jìn)行系列條件優(yōu)化及特異性、靈敏性和重復(fù)性試驗(yàn)。結(jié)果表明:該方法具有很好的特異性和重復(fù)性,外毒素cpa的靈敏度為1.5×10~(-2)ng/m L,且在1.5×104~1.5×10~(-2)ng/m L內(nèi)Ct值與陽性質(zhì)粒濃度的對數(shù)值呈很好的線性關(guān)系,R2值達(dá)到0.991;腸毒素cpe的靈敏度為1.8×10~(-2)ng/m L,且在1.8×103~1.8×10~(-2)ng/m L內(nèi)Ct值與陽性質(zhì)粒濃度的對數(shù)值呈很好的線性關(guān)系,R2值達(dá)到0.996;該方法對大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌等細(xì)菌核苷酸無交叉反應(yīng);批間和批內(nèi)重復(fù)性良好;同時(shí)對實(shí)驗(yàn)室保存的臨床分離的疑似菌株用建立的熒光定量方法進(jìn)行檢測,結(jié)果臨床分離菌株均為A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。說明該雙重?zé)晒舛縋CR方法靈敏度高、特異性強(qiáng)和重復(fù)性好。
[Abstract]:In order to establish a double fluorescence quantitative PCR method for the detection of Clostridium perfringens positive for enterotoxin cpe, the sequence of Clostridium perfringens published in NCBI was compared and the relative conservative sequences of 偽 toxin and cpe were found. Two pairs of primers and one pair of probes were designed and synthesized according to the conserved sequence. The cloned vector containing 偽 toxin and cpe sequence was used as the standard, and a series of optimization conditions, specificity, sensitivity and repeatability tests were carried out. The results show that the method has good specificity and reproducibility. The sensitivity of exotoxin cpa is 1.5 脳 10~(-2)ng/m L, and the logarithmic relationship between Ct value and positive plasmid concentration in 1.5 脳 10 4 10~(-2)ng/m L is very good. R2 is 0.991.The sensitivity of enterotoxin cpe is 1.8 脳 10~(-2)ng/m L, and the logarithm of Ct value and positive plasmid concentration in 1.8 脳 10 3 脳 10~(-2)ng/m L is obtained. The value of R2 was 0.996. The method was applied to the treatment of Escherichia coli. Salmonella, Pasteurella and other bacteria have no cross-reaction with nucleotides, good reproducibility between batches and within batches, and detection of suspected strains of clinical isolates kept in laboratory with established fluorescence quantitative method. Results the clinical isolates were all type A Clostridium perfringens. The results showed that the double fluorescence quantitative PCR method was sensitive, specific and reproducible.
【作者單位】： 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/動(dòng)物胚胎工程及分子育種湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201303044) 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-42-G11) 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院青年科學(xué)基金項(xiàng)目(2014NKYJJ15) 動(dòng)物胚胎工程及分子育種湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目(2016ZD108)
【分類號】：S852.61

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孔慶娟;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的研究進(jìn)展[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年01期

2 李璐;趙寶華;;產(chǎn)氣莢膜梭菌主要致死性毒素的研究進(jìn)展[J];畜牧與飼料科學(xué);2011年04期

3 于立新;蘇佳;趙曉慧;馬學(xué)恩;么宏強(qiáng);;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的基因擴(kuò)增和提純鑒定[J];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年04期

4 趙宇亮;張聰敏;王琳;霍萍萍;趙寶華;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年12期

5 陳興祥,薛家賓,黃克和,王啟明,徐為中;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的提純試驗(yàn)[J];畜牧與獸醫(yī);2002年03期

6 李永明,王開功,文明,周碧君;產(chǎn)氣莢膜梭菌α-毒素的提取與鑒定[J];中國獸醫(yī)科技;2002年02期

7 文其乙,劉秀梵;多重PCR方法快速檢測糞樣中產(chǎn)氣莢膜梭菌[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2002年01期

8 文明,王開功;幾種分離產(chǎn)氣莢膜梭菌培養(yǎng)基的比較[J];中國獸醫(yī)雜志;2002年12期

9 梁源祥,李會(huì)創(chuàng),冼恩廣,李布勇;牛產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)科技;2004年05期

10 趙志軍,許崇波,曾瑾,王玉炯;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因的高效表達(dá)[J];生物技術(shù);2004年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王海榮;呂長輝;趙凱;柴同杰;陸承平;;山東省兔腹瀉病例產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離及基因定型[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會(huì)論文集[C];2012年

2 么宏強(qiáng);蘇佳;于立新;馬學(xué)恩;;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的提純鑒定及其基因的克隆[A];2012年中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)暨中國病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

3 田冬青;蔣玉文;陳小云;楊京嵐;丁家波;;產(chǎn)氣莢膜梭菌多重PCR定型方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2006學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊）[C];2006年

4 李娜;吳建勇;李建軍;楊學(xué)云;王登峰;段新華;王治才;;D型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因的克隆與高效表達(dá)[A];生態(tài)環(huán)境與畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2012年學(xué)術(shù)年會(huì)和第七屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)會(huì)議論文集——T07家畜微生態(tài)與健康養(yǎng)殖專題[C];2012年

5 許崇利;歐陽紅生;許崇波;張艷平;;乳糖誘導(dǎo)劑對重組C型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因表達(dá)的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會(huì)論文集[C];2012年

6 王光華;周繼章;藺國珍;鄭福英;曹小安;韓文祥;楊良存;宋竹青;邱昌慶;;產(chǎn)氣莢膜梭菌青海分離株α毒素基因克隆與核苷酸序列分析[A];第九屆中國生物毒素學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要[C];2009年

7 梁光軍;趙李祥;楊旭芹;賈紅;張小榮;文其乙;劉秀梵;;應(yīng)用多重PCR方法鑒定糞樣和食品中產(chǎn)氣莢膜梭菌[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

8 許崇波;陳向東;許崇利;逄越;高鳳山;;C型產(chǎn)氣莢膜梭菌α、β1、β2基因融合[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

9 裴鳴;張和平;唐昌茂;史寧花;孔芳玲;于維東;白慧勤;馬遠(yuǎn)征;;家畜產(chǎn)氣莢膜梭菌病的病理形態(tài)學(xué)觀察[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十一次獸醫(yī)病理學(xué)、第十次動(dòng)物病理生理學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2001年

10 李潔萍;倪學(xué)勤;曾東;劉麗達(dá);魏豪;;體外篩選拮抗產(chǎn)氣莢膜梭菌的雞源乳酸桿菌[A];第四屆第十次全國學(xué)術(shù)研討會(huì)暨動(dòng)物微生態(tài)企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇論文集（上冊）[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 林初文;產(chǎn)氣莢膜梭菌B型C58-1株α、β1和ε毒素的高效表達(dá)與免疫效力評價(jià)及生產(chǎn)工藝改進(jìn)[D];吉林大學(xué);2015年

2 王光華;產(chǎn)氣莢膜梭菌的分子診斷與免疫研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

3 蔡玉梅;山東省四大湖（庫）淡水魚產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素型調(diào)查及致病機(jī)理研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

4 宋佰芬;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因在干酪乳桿菌基因組中的表達(dá)及免疫效果評價(jià)[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 喬藝然;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌感染雛雞病理形態(tài)學(xué)研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 吳潔;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌家兔感染模型的建立[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 劉雪慧;C、D型產(chǎn)氣莢膜梭菌二價(jià)類毒素疫苗及抗毒素血清的研制[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 聶思靜;產(chǎn)氣莢膜梭菌NetB毒素阻斷ELISA方法的建立與應(yīng)用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 何宇;產(chǎn)氣莢膜梭菌β、ε毒素不同片段的融合表達(dá)及免疫原性研究[D];中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2011年

6 馬壯;廣州市冷鮮雞產(chǎn)氣莢膜梭菌的污染分析及netB菌株的致病性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 鮑長磊;產(chǎn)氣莢膜梭菌不同毒素型多重PCR和α毒素抗體ELISA檢測方法的建立及初步應(yīng)用[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

8 孫劉妹;產(chǎn)氣莢膜梭菌四聯(lián)外毒素基因α-β2-ε-β1在重組干酪乳酸桿菌表達(dá)及遺傳穩(wěn)定性分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

9 王瑩瑩;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌主要抗原蛋白篩選及其免疫保護(hù)作用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

10 康文娟;雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌多重PCR鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

，

本文編號：1965422