發(fā)布時(shí)間：2018-06-01 13:31

  本文選題：鴨疫里默氏桿菌 + S-腺苷高半胱氨酸核苷酶　； 參考：《微生物學(xué)通報(bào)》2017年05期

【摘要】：【目的】分析鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer,RA)不同血清型pfs基因的序列差異,并開展其編碼蛋白S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Mtan,又稱Pfs)的催化活性研究�！痉椒ā縋CR擴(kuò)增9株不同血清型RA的pfs基因,分析其核苷酸序列的同源性;構(gòu)建該基因的重組表達(dá)載體p Cold-RA-pfs,表達(dá)、純化RA的重組蛋白Mtan(RA-Mtan);測定RA-Mtan對(duì)底物S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)的催化活性,運(yùn)用哈維弧菌報(bào)告菌株BB170檢測催化底物的自誘導(dǎo)物2(Autoinducer-2,AI-2)活性。【結(jié)果】對(duì)RA的pfs序列分析結(jié)果表明,不同血清型RA的核苷酸一致性在93.9%-100%之間;SDS-PAGE檢測結(jié)果表明,RA-Mtan呈可溶性表達(dá);酶活測定表明RA-Mtan和禽致病性大腸桿菌(Avain pathogenic Escherichia coli,APEC)的Lux S蛋白共同作用于底物時(shí),可產(chǎn)生濃度為176.7μmol/L的同型半胱氨酸(Homocysteine,HCY);AI-2活性檢測結(jié)果表明,產(chǎn)生的AI-2具有生物學(xué)活性。【結(jié)論】RA不同血清型的pfs高度保守,RA pfs基因的編碼產(chǎn)物RA-Mtan在體外具有催化SAH的活性,RA-Mtan和禽致病性大腸桿菌的Lux S蛋白共同作用于底物SAH時(shí),能產(chǎn)生有活性的AI-2,為進(jìn)一步研究pfs對(duì)RA的調(diào)控作用提供參考。
[Abstract]:[objective] to analyze the sequence differences of pfs gene in different serotypes of Riemerella anatipestifera (RIA). The catalytic activity of its encoding protein S- adenosine homocysteine ribosidase (Pfs) was studied. [methods] the pfs gene of 9 strains of RA with different serotype was amplified by PCR and the homology of nucleotide sequence was analyzed. The recombinant expression vector pCold-RA-pfsof the gene was constructed to express and purify the recombinant protein of RA, and the catalytic activity of RA-Mtan to the substrate S-adenosylhomocysteine (S-adenosylhomocysteine) was determined. BB170 was used to detect the activity of autoinducer 2AI-2. [results] the pfs sequence analysis of RA showed that the nucleotide identity of different serotypes of RA was between 93.9-100%. The results of enzyme activity test showed that the activity of homocysteine (176.7 渭 mol/L) could be produced when RA-Mtan and Lux S protein of avian pathogenic Escherichia coli (Avain pathogenic Escherichia coli) co-acted on the substrate. [conclusion] the encoding product of pfs highly conserved RA pfs gene RA-Mtan has catalytic activity of SAH and Lux S protein of avian pathogenic Escherichia coli on the substrate SAH in vitro. It can produce active AI-2, which provides a reference for further study on the regulation of RA by pfs.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31572546,31370045) 上海市科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目(No.G20150109)~~
【分類號(hào)】：S852.61

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