本文選題：原頭蚴 + EgM123融合蛋白��； 參考：《新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：棘球蚴病是由棘球絳蟲中絳期(幼蟲)引起的一種人畜共患寄生蟲病,其中間宿主種類繁多,但綿羊是最適宜的中間宿主,犬是適宜終末宿主。包蟲病防控措施可通過抑制終末宿主體內(nèi)棘球絳蟲成蟲蟲卵產(chǎn)生以切斷病原循環(huán)鏈,從而減少棘球蚴病的傳播。該寄生蟲在中間宿主體內(nèi)發(fā)育過程中,幼蟲階段產(chǎn)生的原頭蚴(protoscolex,PSC),原頭蚴在體外培養(yǎng)的條件下,可發(fā)育成囊泡,為防治包蟲病在分子調(diào)控、藥物干預(yù)等研究提供一個(gè)良好的模型。本研究主要是利用細(xì)粒棘球絳蟲發(fā)育成熟的成蟲體內(nèi)與發(fā)育相關(guān)的基因Egm123,將其重組到質(zhì)粒pET41b中并轉(zhuǎn)染至大腸桿菌,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)、純化GST-EgM123融合蛋白,并鑒定該蛋白的免疫活性,SDS-PAGE結(jié)果顯示表達(dá)融合蛋白相對分子約為56.1 kD。用GST-EgM123融合蛋白免疫新西蘭大白兔,制備高免血清,經(jīng)Western blot鑒定表達(dá)蛋白的抗原性,并用ELISA方法測定抗體的效價(jià),其效價(jià)達(dá)到1:320000以上。通過原頭蚴體外培養(yǎng)技術(shù)檢測EgM123特異性抗血清對其殺傷率,加入新鮮豚鼠血清開展含補(bǔ)體條件下特異性抗體對體外培養(yǎng)原頭蚴的殺傷率。將原頭蚴與GST-EgM123高免血清、His-EgM123高免血清和兩種高免血清+豚鼠血清共培養(yǎng),經(jīng)相同培養(yǎng)時(shí)間和血清含量不等的培養(yǎng)條件下,與對照組觀察高免血清在體外對原頭蚴免疫殺傷作用。結(jié)果顯示,在高免血清組中兩種血清均滅活補(bǔ)體后,與對照組相比,原頭蚴死亡率差異不顯著(P0.05);正常血清組在200μL高免血清作用6天,原頭蚴死亡率分別為42.53%和51.80%,與對照組相比,差異顯著(P0.05);加入正常豚鼠血清(含補(bǔ)體)的高免血清組,與對照組相比,原頭蚴死亡率達(dá)100%,差異顯著(P0.05)。以上結(jié)果說明,制備出的EgM123抗血清,對體外培養(yǎng)的原頭蚴具有免疫殺傷作用,為研制包蟲病疫苗及進(jìn)行相關(guān)診斷奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Echinococcosis is a zoonotic parasitic disease caused by taeniasis (larva) of Echinococcus spp. There are many kinds of intermediate hosts, but sheep is the most suitable intermediate host and dog is the suitable terminal host. The prevention and control of echinococcosis can reduce the transmission of echinococcosis by inhibiting the generation of adult eggs of Echinococcus solium in the terminal host. During the development of the parasite in the intermediate host, the protoscolexus PSCS produced in the larval stage can develop into vesicles under the condition of culture in vitro, which provides a good model for the molecular regulation and drug intervention of hydatid disease control. In this study, Echinococcus granulosus (Echinococcus granulosus) mature adult Echinococcus granulosus (Echinococcus granulosus) was used to express and purify GST-EgM123 fusion protein by recombinant into plasmid pET41b and transfected into Escherichia coli. The results of SDS-PAGE showed that the relative molecule of the fusion protein was about 56.1 KD. The GST-EgM123 fusion protein was used to immunize New Zealand white rabbits to prepare high immune serum. The antigenicity of the expressed protein was identified by Western blot. The titer of antibody was determined by ELISA method, and the titer was over 1: 320 000. The killing rate of EgM123 specific antiserum was detected by means of culture technique in vitro, and the killing rate of specific antibody against protocercaria in vitro was carried out by adding fresh guinea pig serum. The hyperimmunized serum His-EgM123 of GST-EgM123 and two kinds of serum of guinea pig were co-cultured. Under the same culture time and different content of serum, the immune killing effect of hyperimmunized serum on procaria in vitro was observed with the control group. The results showed that there was no significant difference in the mortality of protocercaria between the two serum groups after inactivation of complement in the high immunized serum group compared with the control group, while in the normal serum group, the mortality rate was 42.53% and 51.80% after 6 days of exposure to 200 渭 L high immunized serum, respectively, compared with the control group, the mortality of the two groups was 42.53% and 51.80% respectively, compared with the control group. Compared with the control group, the mortality rate of protocephalosis reached 100, and the difference was significant (P0.05) in the high immunized serum group with normal guinea pig serum (including complement). The above results suggest that the antiserum prepared from EgM123 has the ability to kill the protocariae cultured in vitro, which lays a foundation for the development of hydatid vaccine and the diagnosis of hydatid disease.
【學(xué)位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.4

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本文編號：1964115