本文選題：犬β-防御素 + 原核表達(dá)　； 參考：《動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展》2017年05期

【摘要】：將犬β-防御素103(canineβ-defensin 103,cBD103)基因亞克隆至原核表達(dá)載體pET-32a(+),構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-cBD103,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21感受態(tài)細(xì)胞,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,利用Ni-NTA親和層析純化該蛋白,并用腸激酶酶切融合蛋白,SDS-PAGE鑒定表達(dá)產(chǎn)物和純化產(chǎn)物。結(jié)果表明,質(zhì)粒pET-cBD103經(jīng)PCR及雙酶切鑒定證明構(gòu)建正確,大腸埃希菌中成功表達(dá)出目的蛋白,蛋白大小約為24ku,以可溶性表達(dá)為主。經(jīng)過純化和酶切,得到大小8ku的cBD103,與預(yù)期大小一致。該研究在大腸埃希菌中表達(dá)了目的蛋白,為下一步大規(guī)模制備cBD103奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The canine 尾 -defensin (103(canine 尾 -defensin 103) gene was subcloned into the prokaryotic expression vector pET-32a (pET-cBD103). The recombinant plasmid pET-cBD103 was transformed into Escherichia coli BL21 receptive cells. The protein was purified by Ni-NTA affinity chromatography. The expressed product and purified product were identified by SDS-PAGE of enterokinase digested fusion protein. The results showed that the plasmid pET-cBD103 was correctly constructed by PCR and double enzyme digestion, and the target protein was successfully expressed in Escherichia coli. The protein size was about 24ku.Soluble expression was dominant. After purification and enzyme digestion, cBD103 of the size of 8ku was obtained, which was in accordance with the expected size. This study expressed the target protein in Escherichia coli and laid a foundation for the further preparation of cBD103.
【作者單位】： 公安部南京警犬研究所警犬技術(shù)公安部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：江蘇省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(BK2010099) 公安部應(yīng)用創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(2010YYCXNJJQ151)
【分類號(hào)】：S852.2

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本文編號(hào)：1960670