發(fā)布時(shí)間：2018-05-29 16:37

  本文選題：羊口瘡病毒 + BL基因��； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2017年09期

【摘要】：【目的】從榆林市具有典型羊口瘡癥狀的陜北白絨山羊唇結(jié)痂病料中分離羊口瘡病毒(Orf virus,ORFV),克隆分析其B2L基因序列,并通過(guò)昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)B2L基因�！痉椒ā坷门ＤI傳代細(xì)胞進(jìn)行ORFV的分離培養(yǎng),通過(guò)PCR的方法從分離到的病毒中擴(kuò)增出B2L全長(zhǎng)基因,測(cè)序后進(jìn)行序列及遺傳進(jìn)化分析。利用擴(kuò)增所得的B2L基因構(gòu)建昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)載體,包裝出桿狀病毒后侵染sf9細(xì)胞,并通過(guò)SDS-PAGE、Western-blot以及質(zhì)譜鑒定等方法驗(yàn)證目的基因的表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】成功分離出1株羊口瘡病毒,命名為ORFV-Yulin株;擴(kuò)增的B2L全長(zhǎng)基因長(zhǎng)度為1 137bp,與Hub13和GY-AHF10株親緣關(guān)系最近,核苷酸序列和氨基酸序列的相似性分別為99%和99.2%。通過(guò)昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了B2L基因,獲得了47ku的重組蛋白�！窘Y(jié)論】從榆林市陜北白絨山羊中獲得了羊口瘡病毒分離株(ORFV-Yulin);通過(guò)昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了ORFV-Yulin株的B2L基因。
[Abstract]:[objective] to isolate Orf virus Orf virus ORFV from scab material of Northern Shaanxi White Cashmere Goat with typical symptoms of aphthous ulcer in Yulin City, and clone and analyze its B2L gene sequence. B2L gene was expressed by baculovirus. [methods] ORFV was isolated and cultured by bovine kidney passage cells. The full-length B2L gene was amplified from the isolated virus by PCR, and sequenced and genetic evolution was analyzed. The insect baculovirus expression vector was constructed by using the amplified B2L gene. The baculovirus was packaged and infected with sf9 cells. The expression of the target gene was confirmed by SDS-PAGEG Western-blot and mass spectrometry. [results] A sheep aphtha virus strain named ORFV-Yulin strain was successfully isolated, and the amplified B2L full-length gene length was 1137 BP, which was closely related to Hub13 and GY-AHF10 strains. The similarity of nucleotide sequence and amino acid sequence was 99. 2% and 99. 2%, respectively. B2L gene was successfully expressed by baculovirus expression system. The recombinant protein of 47ku was obtained. [conclusion] the isolate of sheep mouth sore virus (ORFV-Yulin) was obtained from Shanbei white cashmere goat in Yulin city, and the B2L gene of ORFV-Yulin strain was successfully expressed by insect baculovirus expression system.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;榆林學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;武漢中拓康明生物科技有限公司;
【基金】：陜西省科技廳農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新與攻關(guān)項(xiàng)目(2016NY-120);陜西省科技廳重大統(tǒng)籌項(xiàng)目(2014KTDZ02-01) 陜西省教育廳專項(xiàng)科研計(jì)劃項(xiàng)目(14JK1860) 榆林學(xué)院重點(diǎn)項(xiàng)目(14YK41)
【分類號(hào)】：S852.654

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本文編號(hào)：1951626