發(fā)布時(shí)間：2018-05-29 05:54

  本文選題：豬流行性腹瀉病毒 + 野毒株　； 參考：《畜牧與獸醫(yī)》2017年02期

【摘要】：為建立豬流行性腹瀉病毒(PEDV)野毒株及弱毒疫苗株快速鑒別檢測(cè)方法,根據(jù)Gen Bank中公布的PEDV野毒株及弱毒疫苗株的ORF3基因序列,在缺失區(qū)的兩端設(shè)計(jì)合成1對(duì)特異性擴(kuò)增引物,用以特異性的擴(kuò)增PEDV ORF3基因片段,根據(jù)目的片段大小判斷PEDV的毒株類型;通過(guò)退火溫度等反應(yīng)條件優(yōu)化,建立了區(qū)分PEDV野毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR鑒別檢測(cè)方法。結(jié)果顯示:所建立的RT-PCR鑒別檢測(cè)方法能特異性區(qū)分PEDV野毒株和弱毒疫苗株;PEDV野毒株擴(kuò)增出234 bp目的片段,PEDV弱毒疫苗株擴(kuò)增出185 bp目的片段;與豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、A群豬輪狀病毒(PRo VA)、豬嵴病毒(PKV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、偽狂犬病毒(PRV)、豬瘟病毒(CSFV)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)、豬乙型腦炎病毒(JEV)及豬細(xì)小病毒(PPV)均無(wú)交叉反應(yīng);敏感性試驗(yàn)顯示,該方法能檢測(cè)到病毒滴度為1.3×10~3TCID_(50)/mL。利用該方法對(duì)采集自廣西部分地區(qū)93份臨床腹瀉樣品進(jìn)行檢測(cè),臨床腹瀉樣品中PEDV野毒株陽(yáng)性率為61.29%(57/93),弱毒株陽(yáng)性率為5.38%(5/93)。結(jié)果表明:該RT-PCR鑒別檢測(cè)方法特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便,能快速、準(zhǔn)確地區(qū)分PEDV自然感染野毒株和弱毒疫苗毒株,為豬流行性腹瀉的快速診斷及病原分子鑒別檢測(cè)研究提供了可供借鑒的技術(shù)手段。
[Abstract]:In order to establish a rapid method for identification and detection of wild and attenuated strains of porcine epidemic diarrhea virus (PEV), a pair of specific amplified primers were designed and synthesized at both ends of the deletion region according to the ORF3 gene sequence of PEDV wild strain and attenuated vaccine strain published in Gen Bank. The PEDV ORF3 gene fragment was amplified specifically, and the type of PEDV strain was determined according to the size of the target fragment. By optimizing the reaction conditions such as annealing temperature, a method of RT-PCR identification and detection was established to distinguish PEDV wild strain from attenuated vaccine strain. The results showed that the established RT-PCR identification and detection method could specifically distinguish the PEDV wild strain from the attenuated vaccine strain and amplify the 234bp target fragment of PEDV attenuated vaccine strain and amplify the 185bp target fragment of PEDV attenuated vaccine strain. No cross reaction was found with porcine rotavirus (PRO VAV), porcine cristae virus (PRV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSVV), pseudorabies virus (PRV), swine fever virus (CSFV), porcine circovirus 2 (PCV2), porcine encephalitis virus (JEV) and porcine parvovirus (PPVs). The sensitivity test showed that the virus titer was 1.3 脳 10 ~ (-3) TCID / mL. This method was used to detect 93 clinical diarrhea samples collected from some parts of Guangxi. The positive rate of PEDV field strain was 61.29 / 93% and that of attenuated strain was 5.38% / 93%. The results showed that the RT-PCR method was specific, sensitive, easy to operate, and could be used to distinguish PEDV naturally infected wild strains from attenuated vaccine strains accurately. It provides a useful technique for the rapid diagnosis and molecular identification of porcine epidemic diarrhea.
【作者單位】： 廣西獸醫(yī)研究所/廣西畜禽疫苗新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：廣西水產(chǎn)畜牧科技推廣應(yīng)用項(xiàng)目(桂漁牧科201633041,桂漁牧科201633044,桂漁牧科201633034) 廣西南寧市西鄉(xiāng)塘區(qū)科技項(xiàng)目(2014304)
【分類號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1949749