本文選題：仔豬 + 原代肝細胞��； 參考：《華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報》2017年05期

【摘要】：【目的】研究不同濃度的氨基酸對仔豬原代肝細胞尿素循環(huán)的影響及其機理�！痉椒ā�5日齡仔豬門靜脈灌流后從中分離純化出肝細胞并進行培養(yǎng),在培養(yǎng)基中添加不同濃度的氨基酸(分別為豬血液中氨基酸生理濃度的1、2和4倍),24 h后收集上清和細胞。用比色法檢測上清中尿素、底物氨和細胞中氨的濃度以及谷氨酰胺酶(Glutaminase,GLS)和谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)的活性,實時熒光定量PCR法檢測細胞中氨甲酰磷酸合成酶1(Carbamyl phosphate synthetase 1,CPS1)、精氨基琥珀酸合成酶(Argininosuccinate synthetase,ASS)、精氨琥珀酸裂解酶(Argininosuccinate lyase,ASL)、鳥氨酸氨甲酰轉(zhuǎn)移酶(Omithine transcarbamylase,OTC)和精氨酸酶(Arginase,ARG)等尿素循環(huán)相關(guān)酶基因m RNA的表達�！窘Y(jié)果】4倍氨基酸組顯著提高了仔豬原代肝細胞培養(yǎng)上清中氨和尿素的濃度,增強了細胞中GLS的活性。熒光定量PCR結(jié)果表明,4倍氨基酸組顯著提高了細胞中CPS1、ASS和ASL等基因m RNA的表達。1.0和2.0 mmol·L~(-1)的NH4Cl顯著促進細胞尿素的合成�！窘Y(jié)論】在仔豬原代肝細胞中,高濃度氨基酸可以通過提高GLS的活性等途徑加速氨的積累,促進CPS1、ASS、ASL等尿素循環(huán)相關(guān)酶基因m RNA的表達,從而促進尿素的生成。
[Abstract]:[objective] to study the effect of different concentrations of amino acids on urea circulation in primary hepatocytes of piglets and its mechanism. [methods] Hepatocytes were isolated and cultured from 5-day-old piglets after portal vein perfusion. Supernatants and cells were collected by adding different concentrations of amino acids (1, 2 and 4 times of physiological concentration of amino acids in pig blood) to the culture medium for 24 h. The concentrations of urea, substrate ammonia and ammonia in the supernatant, and the activities of glutamine synthetase Glutaminase (GLSs) and glutamine synthetase (Glutamine synthetaseGlutamine) were determined by colorimetric method. Real-time fluorescence quantitative PCR assay for the detection of urea cycle related to carbamyl phosphate synthase (1(Carbamyl phosphate synthetase 1), argino succinate synthetase (Argino succinate synthetase), arginino succinate lyase (Arginino succinate lyase), ornithine carbamyltransferase (Omithine transcarbamyltransferase) and arginase (ARG) in cells [results] 4-fold amino acid group significantly increased the concentration of ammonia and urea in the supernatant of primary hepatocyte culture of piglets. The activity of GLS was enhanced. The results of fluorescence quantitative PCR showed that 4 fold amino acid group significantly increased the expression of m RNA, such as CPS1, ASS and ASL, and the NH4Cl of 2. 0 and 2. 0 mmol Ln-1) significantly promoted the synthesis of urea. [conclusion] in the primary hepatocytes of piglets, the expression of CPS1, ASS and ASL genes was significantly increased. The high concentration of amino acids can accelerate the accumulation of ammonia by increasing the activity of GLS, and promote the expression of the gene m RNA of urea cycle related enzymes such as CPS1, ASS, ASL and so on, thus promoting the formation of urea.
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院;
【基金】：973項目(2013CB127304)
【分類號】：S828

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本文編號：1939664