本文選題：H9N2亞型禽流感病毒 + 鵝　； 參考：《揚(yáng)州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：H9N2亞型禽流感的遺傳結(jié)構(gòu)復(fù)雜多變,難以防制,已成為嚴(yán)重威脅中國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的因素。本研究從江蘇省揚(yáng)州市活禽市場(chǎng)和揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院疑似禽流感病的病鵝中分離到三株鵝源H9N2亞型流感病毒,分別命名為A/Goose/Jiangsu/YZ527/2011(H9N2,縮寫 Gs/JS/YZ527/11)、A/Goose/Jiangsu/SQ1 19/2012(H9N2,縮寫 Gs/JS/SQ1 19/12)和A/Goose/Jiangsu/JD564/2012(H9N2,縮寫 Gs/JS/JD564/12),并對(duì)這三株病毒的基因特征、對(duì)雞和鵝的感染特性及其在鵝和雞中誘導(dǎo)的天然免疫應(yīng)答的差異進(jìn)行了分析。基因特征結(jié)果顯示,Gs/JS/SQ119/12株的HA和PB2基因分別屬于G9-like分支和 G1-like 分支,Gs/JS/YZ527/1 1 和 Gs/JS/JD564/12 株的 HA 和 PB2 均屬于 F/98-like 分支;Gs/JS/YZ527/1 1、Gs/JS/SQ1 19/12 和 Gs/JS/JD564/12 三株病毒的 NA、PB1、PA、NS 和 NP 基因均屬于 F/98-like 分支;Gs/JS/YZ527/11 和Gs/JS/SQ1 19/12 的 M 基因?qū)儆?G1-like 分支,Gs/JS/JD564/12 的 M 基因?qū)儆贔/98-like 分支,結(jié)果表明鵝源 H9N2病毒 Gs/JS/YZ527/11 株由 G1-like 和 F/98-like二個(gè)分支重組;Gs/JS/SQ119/12株是由G9-like、G1-like和F/98-like三個(gè)分支重組而成;Gs/JS/JD564/12株的8個(gè)基因全部來自F/98-like分支。3個(gè)分離株的HA基因裂解位點(diǎn)均為RSSR↓GLF;但是在構(gòu)成受體結(jié)合位點(diǎn)的袋狀結(jié)構(gòu)的198位、233-234位氨基酸和糖基化位點(diǎn)有差異;與Ck/SH/F/98株相比,分離株NA基因上的紅細(xì)胞吸附位點(diǎn)和糖基化位點(diǎn)均發(fā)生了變化。致病性試驗(yàn)表明,Gs/JS/JD564/12株都只能對(duì)一部分的雞和鵝產(chǎn)生感染性,Gs/JS/JD527/1 1和Gs/JS/SQ119/12兩株病毒對(duì)雞、鵝都具有感染性。以上結(jié)果表明,同樣分離自鵝的三株H9N2亞型禽流感病毒的基因組來源復(fù)雜,對(duì)雞和鵝的感染率有顯著差異。雞和鵝分別是禽流感病毒的陸生和水生宿主,通常雞對(duì)禽流感病毒較易感,而鵝對(duì)于禽流感病毒則有較強(qiáng)的抵抗能力,它們對(duì)于禽流感病毒都有其各自獨(dú)特的免疫應(yīng)答特征。本論文利用免疫熒光定量PCR方法,比較了本研究分離的三株鵝源H9N2亞型禽流感病毒感染雞和鵝免疫應(yīng)答的差異性。Gs/JS/SQ1 19/12株在感染雞后第三天(3dpi),誘導(dǎo)雞產(chǎn)生的TLR-7和IFN-γ的表達(dá)量顯著上調(diào),與未感染雞出現(xiàn)明顯的差異,其中Gs/JS/SQ119/12攻毒組雞表達(dá)TLR-7和IFN-γ的量分別是未攻毒雞的3.7倍(P0.05)和2.2倍(P0.05);而Gs/JS/SQ119/12株在感染鵝1dpi,誘導(dǎo)鵝表達(dá)的TLR-7的量明顯升高,表達(dá)量是未攻毒鵝的4倍(P0.01)。Gs/JS/YZ527/11株在感染雞后,只有IFN-γ的表達(dá)量在3dpi的時(shí)候有明顯的上調(diào),表達(dá)量是未攻毒雞的2.1倍(P0.05)。表明宿主雞啟動(dòng)了干擾素的抗病毒程序,但是其他因子的表達(dá)量并沒有發(fā)生顯著變化。Gs/JS/YZ527/11株在感染鵝1dpi,誘導(dǎo)鵝產(chǎn)生的TLR-7的表達(dá)量明顯上調(diào),其表達(dá)量是未攻毒鵝的2.3倍(P0.05)。以上結(jié)果表明Gs/JS/SQ119/12株和Gs/JS/YZ527/11株一樣,在宿主鵝中啟動(dòng)Toll樣受體的識(shí)別比在雞中更早和更快。Gs/JS/JD564/12株在感染雞1dpi,誘導(dǎo)雞產(chǎn)生的TLR-7的表達(dá)量就顯著上調(diào),是未感染雞的2.7倍(P0.05)。與Gs/JS/JD564/12株具有很高同源性的F/98株病毒,也在感染雞1dpi誘導(dǎo)雞產(chǎn)生的TLR-7的表達(dá)量就出現(xiàn)顯著地上調(diào),其表達(dá)量是未攻毒雞的6.1倍(P0.01)。這表明鵝源Gs/JS/JD564/12株和雞源F/98株一樣,均能快速啟動(dòng)宿主雞的天然免疫應(yīng)答,但是F/98株在雞中誘導(dǎo)的TLR-7的表達(dá)量顯著高于Gs/JS/JD564/12株(P0.05)。在鵝宿主中,Gs/JS/JD564/12株在感染鵝1dpi,誘導(dǎo)鵝產(chǎn)生的TLR-21的表達(dá)量就出現(xiàn)了顯著地上調(diào),為未攻毒鵝的4.2倍(P0.01),并且誘導(dǎo)鵝產(chǎn)生的RIG-Ⅰ的表達(dá)量也出現(xiàn)顯著地上調(diào),其表達(dá)量是未攻毒鵝的4.9倍(P0.01)。表明Gs/JS/JD564/12株同樣能快速地引起宿主鵝的天然免疫應(yīng)答。在雞宿主中,Gs/JS/JD564/12株與雞源F/98株誘導(dǎo)IL-1β表達(dá)的速度仍然有顯著差異,Gs/JS/JD564/12攻毒組雞IL-1β的表達(dá)量是在1 dpi就顯著上調(diào),為未攻毒雞的5.5倍(P0.01);而F/98株攻毒組雞IL-1β的表達(dá)量在3 dpi時(shí)才開始顯著上調(diào),是未攻毒雞的1.9倍(P0.05),表明相對(duì)于F/98株,宿主雞能更迅速的清除Gs/JS/JD564/12株病毒。此外,感染了 Gs/JS/JD564/12株的鵝體內(nèi)各因子表達(dá)量均顯著高于感染了 Gs/JS/JD564/12株的雞,這個(gè)差值在5 dpi達(dá)到最高峰。5 dpi時(shí),Gs/JS/JD564/12株誘導(dǎo)宿主鵝表達(dá)的TLR-21量是宿主雞的34.5倍(P0.01);IFN-α的表達(dá)量是宿主雞的46倍(P0.01);IFN-γ的表達(dá)量是宿主雞的21.6倍(P0.01);IL-1β的表達(dá)量是宿主雞的14倍(P0.01);IL-6的表達(dá)量是宿主雞的13.7倍(P0.01)。表明Gs/JS/JD564/12毒株不僅能迅速被宿主鵝識(shí)別,并能引發(fā)比宿主雞更強(qiáng)烈的天然免疫反應(yīng),這與F/98株能引起宿主雞產(chǎn)生比宿主鵝強(qiáng)烈的天然免疫反應(yīng)的結(jié)果剛好相反。分析Gs/JS/JD564/12和F/98株的基因序列發(fā)現(xiàn),兩株病毒具有非常高的同源性,其HA,PB2,PB1,PA,NS,NP,M七個(gè)基因片段的同源性都達(dá)到了 99.2%以上,只有NA基因的同源性為92.7%。與F/98株相比,Gs/JS/JD564/12株的NA基因在264位新增了一個(gè)糖基化位點(diǎn)NIS,此位點(diǎn)是否與兩株病毒的致病性和天然免疫反應(yīng)的巨大差異有關(guān)需要進(jìn)一步研究。綜合以上結(jié)果發(fā)現(xiàn),本研究分離的三株鵝源分離株在宿主鵝中誘導(dǎo)的天然免疫應(yīng)答強(qiáng)于其在宿主雞中的天然免疫應(yīng)答。
[Abstract]:The results showed that the HA and PB2 genes of Gs / JS / SQ119 / 12 and Gs / JS / SQ1 19 / 12 and Gs / JS / JD564 / 12 belong to F / 98 - like branches . The results showed that the expression of TLR - 7 and IFN - 緯 in chickens and geese was significantly higher than that of chickens and geese . The results showed that Gs / JS / SQ1 19 / 12 strains could only produce infectivity to chickens and geese . Compared with F / 98 strain , the expression of IL - 1尾 and IL - 1尾 in the host chicken were significantly higher than that of the host chicken ( P0.01 ) .
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1927851