本文選題：中試加米霉素注射液 + 多殺性巴氏桿菌　； 參考：《石河子大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:大環(huán)內(nèi)酯類抗生素在動(dòng)物呼吸道感染的治療上起著十分重要的作用。該藥主要通過(guò)直接與細(xì)菌核糖體的50S亞基結(jié)合抑制蛋白質(zhì)的合成。目前臨床上使用治療呼吸道感染的藥物都存在不同程度的局限性,隨著新耐藥菌的不斷出現(xiàn),研制新型大環(huán)內(nèi)酯類抗生素迫在眉睫。法國(guó)梅里亞(MERIAL)公司開發(fā)的加米霉素(Gamithromycin)是動(dòng)物專用抗生素,該藥分別于2007、2010和2011年被歐洲藥品局、加拿大保健產(chǎn)品與食品管理局和美國(guó)食品與藥品管理局批準(zhǔn)用于防治溶血性曼氏桿菌、多殺性巴氏桿菌和睡眠嗜組織菌引起的牛呼吸道疾病。由于加米霉素具有吸收快、分布廣,肺組織中濃度高,消除緩慢,藥效持久,安全性高等優(yōu)點(diǎn)。本試驗(yàn)對(duì)天津中升研發(fā)的中試加米霉素注射液進(jìn)行抗菌活性、毒性、安全性評(píng)價(jià)等方面進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià),為藥品的研發(fā)和申報(bào)批號(hào)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。方法:1、采集臨床以呼吸道癥狀發(fā)病牛的肺臟組織、氣管積液以及皮下膠凍樣浸潤(rùn)液,在無(wú)菌條件下接種于BHI肉湯中,分離純化,經(jīng)過(guò)細(xì)菌形態(tài)染色觀察、培養(yǎng)特性和生化鑒定,以及細(xì)菌16S rRNA序列分析以確定治病菌種屬,通過(guò)PCR的方法擴(kuò)增16S rRNA,測(cè)序比對(duì)分析;利用細(xì)菌種屬特異性的基因Kmt-1來(lái)確定細(xì)菌的種屬。2、參考CLSI的有關(guān)方法,采用微量二倍稀釋法測(cè)定中試加米霉素注射液對(duì)已分離出的牛肺炎支原體、多殺性巴氏桿菌和溶血曼式桿菌的最小抑菌濃度(MIC)。3、采用改良寇氏法對(duì)66只清潔級(jí)昆明系健康小鼠的半數(shù)致死量(LD50)進(jìn)行測(cè)定;小鼠連續(xù)背部皮下給藥28d,觀察其對(duì)小鼠的長(zhǎng)期毒性,中試加米霉素注射液分為高、中、低三個(gè)劑量(分別為219、109.4、10.94 mg/kg)和溶劑組,對(duì)臟器系數(shù)和組織病理學(xué)進(jìn)行觀察。4、按照《化學(xué)藥物刺激性、過(guò)敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》(2005年)進(jìn)行家兔皮膚刺激試驗(yàn)、家兔注射部位刺激試驗(yàn)、體外溶血試驗(yàn)、豚鼠全身主動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)和豚鼠全身被動(dòng)過(guò)敏試驗(yàn)。結(jié)果:1、病牛病變的肺臟組織、氣管積液以及皮下膠凍樣浸潤(rùn)液中分離出3株露珠狀、不溶血、灰白色的菌落,經(jīng)革蘭氏染色液染色后鏡檢,可觀察到革蘭氏陰性球桿菌,經(jīng)過(guò)梅里埃公司的細(xì)菌生化檢定儀以及相關(guān)配套試紙條(VITEK 2 COMPACT)對(duì)菌株進(jìn)行生化鑒定,結(jié)果判定為多殺性巴氏桿菌。16S rRNA序列分析與NCBI上已經(jīng)公布的多殺性巴氏桿菌16S rRNA序列同源性在99%以上。將分離的巴氏桿菌注射到小鼠體內(nèi),小鼠全部死亡。結(jié)果表明,從病牛體內(nèi)分離得到3株多殺性巴氏桿菌。2、中試加米霉素對(duì)質(zhì)控菌株(多殺性巴氏桿菌、溶血曼氏桿菌、金黃色葡萄球菌、支原體)抑菌效果明顯,最小抑菌濃度分別均為0.5μg/mL、0.5μg/mL、0.5μg/mL和1μg/mL,符合《動(dòng)物源性細(xì)菌抗菌藥物敏感性試驗(yàn)紙片法稀釋法執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)》上的質(zhì)控范圍(0.5-4μg/mL),以及CLSI中《微量肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法測(cè)定肺炎支原體MIC(μg/mL)解釋折點(diǎn)指南》上的質(zhì)控范圍(0.5-1μg/m L)。3、加米霉素注射液LD50為1094.2mg/kg,95%可信限范圍為1000.0 mg/kg-1196.7mg/kg;連續(xù)28d背部皮下給藥的慢性毒性結(jié)果顯示動(dòng)物臟器系數(shù)以及組織病理學(xué)檢查與對(duì)照組相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、體外溶血試驗(yàn)結(jié)果為陰性,家兔刺激試驗(yàn)為陰性,豚鼠全身過(guò)敏試驗(yàn)結(jié)果為陰性。結(jié)論:成功從病牛體內(nèi)分離得到多殺巴氏桿菌。中試加米霉素注射液對(duì)于引起牛呼吸系統(tǒng)疾病的溶血性曼氏桿菌和多殺性巴氏桿菌以及支原體有較高的抗菌活性。根據(jù)化學(xué)物急性毒性LD50劑量分級(jí)表明加米霉素注射液屬于低毒性藥物,并結(jié)合刺激性試驗(yàn)、體外溶血性試驗(yàn)、全身過(guò)敏性試驗(yàn)的結(jié)果,表明中試加米霉素注射液不會(huì)對(duì)靶動(dòng)物產(chǎn)生不良影響。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S859.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1926995