本文選題：重組粘粒 + 重組火雞皰疹病毒��； 參考：《中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年11期

【摘要】：為構(gòu)建同時(shí)表達(dá)禽流感病毒(AIV)HA蛋白及傳染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重組火雞皰疹病毒(r HVT),本研究以本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的連續(xù)覆蓋火雞皰疹病毒(HVT)全基因組的5個(gè)重組粘粒(p Fos A、p Fos B、p Fos C、p Fos D和p Fos E)為基礎(chǔ),利用豬捷申病毒2A蛋白的編碼序列,將HA基因和VP2基因串聯(lián),并克隆于p CAGGs載體中,構(gòu)建重組質(zhì)粒p CA-HA-2A-VP2。利用Gateway LR克隆技術(shù),將重組質(zhì)粒中的HA-2A-VP2的表達(dá)盒(Pec-HA-2A-VP2-POLYA)插入到p Fos C粘粒中HVT片段的復(fù)制非必需區(qū)HVT053與HVT054基因之間,構(gòu)建重組粘粒p Fos C-5354-HA-VP2。將p Fos A、p Fos B、p Fos D、p Fos E和p Fos C-5354-HA-VP2 5個(gè)重組粘粒共轉(zhuǎn)染雞胚成纖維細(xì)胞(CEF),制備表達(dá)HA蛋白及VP2蛋白的重組火雞皰疹病毒(r HVT-5354-HA-VP2)。將重組病毒在CEF中連續(xù)傳至20代后,通過PCR、間接免疫熒光和western blot鑒定分析,結(jié)果顯示HA與VP2基因能夠在重組病毒中穩(wěn)定存在并正確表達(dá);生長動(dòng)力學(xué)結(jié)果表明,重組病毒在CEF中的增殖效率與野生型病毒HVT無顯著差異。該重組病毒的制備為研制AIV-IBDV-馬立克病毒三聯(lián)苗奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to construct a recombinant turkey herpesvirus (rHVT) expressing both AIVH HA protein and IBDVV VP2 protein of avian influenza virus (AIV), five recombinant mucks were constructed from the whole genome of continuously covering turkey herpesvirus (HVT) constructed in our laboratory. On the basis of Fos, Fos, Fos, Fos D and p Fos E). The HA gene and VP2 gene were sequenced and cloned into p CAGGs vector to construct the recombinant plasmid pCA-HA-2A-VP2. Using Gateway LR cloning technique, the expression cassette of HA-2A-VP2 in the recombinant plasmid Pec-HA-2A-VP2-POLYA) was inserted between HVT053 and HVT054 gene, the non-essential region of the HVT fragment in the p Fos C clay. The recombinant clay p Fos C-5354-HA-VP2was constructed. Five recombinant mucosomes, p Fos Agna and p Fos C-5354-HA-VP2, were co-transfected into chicken embryonic fibroblasts (CEF) to prepare recombinant turkey herpesvirus (rHVT-5354-HA-VP2P) expressing HA protein and VP2 protein. After the recombinant virus was transmitted to CEF for 20 generations, the results of indirect immunofluorescence and western blot analysis showed that HA and VP2 genes could be stably expressed in the recombinant virus, and the growth kinetics showed that HA and VP2 genes could be expressed correctly in the recombinant virus. The proliferation efficiency of recombinant virus in CEF was not significantly different from that of wild-type virus HVT. The preparation of the recombinant virus laid a foundation for the development of AIV-IBDV- Marek virus triple vaccine.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：“十二五”農(nóng)村領(lǐng)域國家科技計(jì)劃(2015BAD12B03)
【分類號】：S852.65

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本文編號：1926604