本文選題：新城疫病毒 + SOE　； 參考：《中國(guó)病原生物學(xué)雜志》2017年03期

【摘要】：目的以豬源新城疫病毒JL02/2000株為模板,構(gòu)建新城疫病毒反向遺傳研究所需的基因起始片段。方法將NDV起始片段(ND1,226-4 916bp)設(shè)計(jì)拆分為ND1-1、ND1-2、ND1-3、ND1-4的4個(gè)約1.2kb的小片段,分別PCR擴(kuò)增各片段,后采用SOE PCR技術(shù)將ND1-1、ND1-2拼接成中間片段ND1-1-2,將ND1-3、ND1-4拼接為ND1-3-4,再經(jīng)第二次SOE-PCR整合拼接ND1-1-2和ND1-3-4片段,完成NDV起始片段ND1的構(gòu)建,并連接到pCI載體上,構(gòu)建pCIND1質(zhì)粒,最后經(jīng)酶切PCI-ND1質(zhì)粒并送測(cè)序鑒定目的片段是否構(gòu)建正確并成功連接到pCI載體上。結(jié)果經(jīng)PCR擴(kuò)增得到ND1-1、ND1-2、ND1-3、ND1-4共4個(gè)分別約1 200bp大小的片段,經(jīng)第一輪SOE-PCR得到ND1-1-2和ND1-3-4兩個(gè)2 200bp左右的片段,第二輪SOE-PCR得到4 900bp左右的ND1片段。連接產(chǎn)物PCI-ND1質(zhì)粒經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定片段大小和序列與預(yù)期相符。結(jié)論成功構(gòu)建了新城疫病毒基因起始片段(226-4 916bp),為構(gòu)建新城疫病毒全長(zhǎng)基因奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct the gene initiation fragment of Newcastle disease virus (NDV) by using JL02/2000 strain of Newcastle disease virus (NDV) as template. Methods four 1.2kb fragments of ND1-1 + Nd1-2Nd1-2Nd1-3 + Nd1-4 were designed by NDV starting fragment nd1226-4,916bp. each fragment was amplified by PCR. Then ND1-1Nd1-2 was spliced into ND1-1-2, ND1-3ND1-4 was spliced into ND1-3-4, and then ND1-1-2 and ND1-3-4 fragments were spliced into Nd1-3ND1-4 by the second SOE-PCR integration, and the fragments of Nd1-1nd1-2 and ND1-3ND1-4 were spliced into ND1-1-2and ND1-3ND1-4 by SOE PCR technique. The ND1 fragment of NDV was constructed and ligated to the pCI vector to construct the pCIND1 plasmid. Finally, the PCI-ND1 plasmid was digested and sequenced to confirm whether the target fragment was constructed correctly and successfully connected to the pCI vector. Results four fragments about 1 200bp in size were obtained by PCR amplification. Two 200bp fragments of ND1-1-2 and ND1-3-4 were obtained by the first round SOE-PCR, and the ND1 fragments of 4 900bp were obtained from the second round of SOE-PCR. The fragment size and sequence of the ligated PCI-ND1 plasmid were confirmed by restriction endonuclease digestion and sequencing. Conclusion the gene initiation fragment of Newcastle disease virus (NDV) was successfully constructed, which laid a foundation for the construction of the full-length gene of Newcastle disease virus (NDV).
【作者單位】： 吉林大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所;長(zhǎng)春生物制品研究所有限責(zé)任公司;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31272573) 吉林省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.20130101093JC) 吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(No.20140623019TC,20160623024TC)
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：1904204