本文選題：腦心肌炎病毒 + C蛋白酶　； 參考：《中國(guó)畜牧獸醫(yī)》2017年06期

【摘要】：為獲得豬腦心肌炎病毒(EMCV)3C蛋白并進(jìn)一步了解其結(jié)構(gòu),本研究以EMCV HB10株的RNA為模板,通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增3C基因,將其克隆至pMD18-T載體,經(jīng)PCR、雙酶切和測(cè)序鑒定,挑選測(cè)序正確的質(zhì)粒經(jīng)雙酶切獲得目的片段并將其克隆至pET32a載體以構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌TranSetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,SDS-PAGE檢測(cè)目的蛋白表達(dá)情況,Western blotting檢測(cè)純化后3C蛋白及其對(duì)EMCV的反應(yīng)原性。結(jié)果顯示,成功克隆3C基因,長(zhǎng)度為615bp,編碼205個(gè)氨基酸。SDS-PAGE結(jié)果顯示,3C蛋白主要以包涵體形式表達(dá),His-3C蛋白大小約為40ku。Western blotting分析可知,純化后His-3C蛋白條帶單一,同時(shí)3C蛋白與EMCV細(xì)胞毒有良好的反應(yīng)原性。經(jīng)生物分析軟件預(yù)測(cè)可知,EMCV 3C蛋白為非分泌蛋白,無(wú)跨膜區(qū),有多個(gè)磷酸化位點(diǎn),參與蛋白的水解過(guò)程。3C蛋白酶作為EMCV基因組編碼蛋白中唯一的蛋白酶,在病毒復(fù)制的過(guò)程中具有不可或缺的作用。本研究成功構(gòu)建了EMCV 3C蛋白原核表達(dá)載體并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測(cè),為進(jìn)一步研究3C蛋白的作用及催化機(jī)理奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to obtain the protein of porcine encephalomyocarditis virus (EMC V3 C) and further understand its structure, the RNA of EMCV HB10 strain was used as template, the 3C gene was amplified by RT-PCR, cloned into pMD18-T vector, and identified by PCR, double enzyme digestion and sequencing. The target fragment was obtained by double enzyme digestion and cloned into pET32a vector to construct the recombinant prokaryotic expression plasmid. The recombinant plasmid was transformed into E. coli tranSetta-DE3) competent cells. The expression of the target protein was detected by SDS-PAGE after IPTG induction. The purified 3C protein and its reactivity to EMCV were detected by Western blotting. The results showed that 3C gene was cloned successfully, the length was 615bpand encoded 205 amino acids. SDS-PAGE showed that the size of His-3C protein expressed mainly in inclusion body was about 40ku.Western blotting, and the His-3C protein band was single after purification. At the same time, 3C protein has good reactivity with EMCV cytotoxicity. According to the prediction of bioanalysis software, EMCV3C protein is a non-secretory protein with no transmembrane region, and there are many phosphorylation sites. The protease. 3C protease is the only protease in the EMCV genome coding protein. It plays an indispensable role in the process of virus replication. In this study, the prokaryotic expression vector of EMCV 3C protein was successfully constructed and its structure was predicted, which laid a foundation for further study on the function and catalytic mechanism of 3C protein.
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所;
【基金】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院創(chuàng)新工程項(xiàng)目(ASTIP-IAS15)
【分類號(hào)】：S852.651

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 白娟;蔣康富;王先煒;李玉峰;姜平;;一株豬源腦心肌炎病毒的分離與鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2010年12期

2 凡靜靜;馮若飛;馬忠仁;;腦心肌炎病毒及其蛋白結(jié)構(gòu)和功能研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年02期

3 張海霞;馮若飛;王丹;凡靜靜;李向茸;楊妍梅;馬忠仁;馮玉萍;;腦心肌炎病毒的體外細(xì)胞增殖培養(yǎng)及其凍干保存試驗(yàn)[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2012年11期

4 王丹;馮若飛;張海霞;凡靜靜;謝晶瑩;馬忠仁;馮玉萍;;腦心肌炎病毒環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增快速檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2013年10期

5 Thomas G.Murname;賈偉;;腦心肌炎病毒[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);1986年02期

6 黃紹棠;對(duì)腦心肌炎病毒的最新認(rèn)識(shí)[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;1994年03期

7 蓋新娜;楊漢春;郭鑫;呂艷麗;王芳;陳艷紅;查振林;;豬腦心肌炎病毒的分離與鑒定[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2007年01期

8 劉洋;馬國(guó)文;;豬病毒性腦心肌炎的診斷與防制[J];內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年06期

9 趙婷;張家龍;蓋新娜;郭鑫;周磊;陳艷紅;查振林;楊漢春;;豬源和鼠源腦心肌炎病毒分離株基因組的比較分析[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年06期

10 常洪濤;劉慧敏;陳陸;楊霞;趙軍;王新衛(wèi);姚惠霞;王川慶;;不同動(dòng)物源腦心肌炎病毒的分離、鑒定和全基因組序列分析[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年09期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張嶺嶺;王金鳳;王嬌;趙澤坤;孫繼國(guó);袁萬(wàn)哲;;豬腦心肌炎病毒的分離與鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)食品衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 張永寧;蓋新娜;郭鑫;楊漢春;;自噬促進(jìn)腦心肌炎病毒在宿主細(xì)胞中的復(fù)制[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國(guó)微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國(guó)獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

3 蓋新娜;楊漢春;郭鑫;呂艷麗;王芳;陳艷紅;查振林;;豬腦心肌炎病毒的分離與鑒定[A];第四屆中國(guó)畜牧科技論壇論文集[C];2009年

4 賀東生;李康寧;;豬腦心肌炎病毒分子生物學(xué)和診斷方法的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

5 施開創(chuàng);陳進(jìn)喜;屈素潔;許瑞勝;熊毅;劉棋;陳漢忠;李剛;;豬腦心肌炎病毒SYBR Green Ⅰ real-time PCR檢測(cè)方法的建立[A];第四屆中國(guó)畜牧科技論壇論文集[C];2009年

6 魏瑩;蓋新娜;賈紅;郭鑫;楊漢春;;豬腦心肌炎病毒VP2蛋白單克隆抗體的制備及其識(shí)別表位分析[A];微生物與人類健康科技論壇論文匯編[C];2009年

7 陳興慧;何慶東;白娟;王先煒;姜平;;腦心肌炎病毒VP1蛋白B細(xì)胞表位解析與阻斷ELISA抗體檢測(cè)方法的建立[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

8 張國(guó)慶;郭鑫;蓋新娜;楊漢春;;豬腦心肌炎病毒BJC3分離株全基因組序列測(cè)定與分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2006學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2006年

9 賈紅;蓋新娜;陳振海;郭鑫;楊漢春;;siRNA特異性抑制豬腦心肌炎病毒在BHK-21細(xì)胞中的復(fù)制[A];微生物與人類健康科技論壇論文匯編[C];2009年

10 蓋新娜;楊漢春;郭鑫;陳艷紅;查振林;;豬腦心肌炎病毒分離毒株VP1和3D基因的序列分析[A];第一屆中國(guó)養(yǎng)豬生產(chǎn)和疾病控制技術(shù)大會(huì)——2005中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 侯磊;腦心肌炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白參與病毒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡的分子機(jī)制[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 馮若飛;腦心肌炎病毒雙抗原夾心ELISA建立、血清學(xué)調(diào)查、毒株分離及RNA干擾研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

3 常洪濤;腦心肌炎病毒河南流行株病原學(xué)、診斷方法和疫苗的研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 蓋新娜;豬腦心肌炎病毒VP1基因的原核表達(dá)、血清學(xué)調(diào)查及分離毒株的鑒定[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 于會(huì)彬;腦心肌炎病毒HB10株感染性cDNA克隆的構(gòu)建及其應(yīng)用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 方譜縣;豬腦心肌炎病毒NJ08株感染性cDNA克隆構(gòu)建及拯救病毒生物學(xué)特性[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 張嶺嶺;豬腦心肌炎病毒的分離鑒定及RT-LAMP快速檢測(cè)方法的建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

4 韋鵬建;腦心肌炎病毒VP1片段基因穩(wěn)定性、原核表達(dá)及應(yīng)用研究[D];西北民族大學(xué);2011年

5 張國(guó)龍;豬腦心肌炎病毒VP1蛋白的表達(dá)與單克隆抗體的研制[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 張海霞;腦心肌炎病毒LAMP及Real-time PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[D];西北民族大學(xué);2013年

7 楊妍梅;腦心肌炎病毒細(xì)胞受體篩選及初步鑒定[D];西北民族大學(xué);2014年

8 陳宏備;豬源腦心肌炎病毒GXLC株致病性研究[D];廣西大學(xué);2011年

9 陳興慧;豬腦心肌炎病毒VP1蛋白B細(xì)胞表位解析及其阻斷ELISA抗體檢測(cè)方法的建立[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

10 凡靜靜;腦心肌炎病毒VP1基因重組腺病毒的構(gòu)建及對(duì)小鼠免疫效果研究[D];西北民族大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：1894696