發(fā)布時間：2018-05-14 22:40

  本文選題：豬流行性腹瀉病毒 + 野毒株　； 參考：《中國獸醫(yī)科學》2017年01期

【摘要】：為建立豬流行性腹瀉病毒(PEDV)的快速鑒別檢測方法,針對PEDV基因序列設計3對特異性引物。第1對引物擴增野毒株(經(jīng)典株、變異株)和疫苗株ORF3基因198 bp和148 bp片段;第2對引物擴增經(jīng)典株和疫苗株S基因429 bp片段;第3對引物擴增變異株S基因274 bp片段。經(jīng)過反應條件的優(yōu)化,建立了能夠同時檢測并區(qū)分PEDV經(jīng)典株、變異株及疫苗株的多重RT-PCR檢測方法。該方法可以特異地檢測PEDV,而與豬的其他重要病原FMDV、CSFV、PRRSV、TGEV、PRo V、PCV2、PRV無交叉反應;對重組質粒標準品的檢出下限為2.62×10~2copies/L;重復試驗獲得了均勻一致的結果。應用該方法檢測336份臨床病料,PEDV陽性的120份,其中變異株96份、疫苗株21份、變異株和疫苗株混合感染3份。結果表明,本研究所建立的多重RT-PCR檢測方法特異性強、敏感性高、重復性好,可用于PEDV經(jīng)典株、變異株和疫苗株的快速鑒別檢測和流行病學調查。
[Abstract]:In order to establish a rapid method for identification and detection of porcine epidemic diarrhea virus (PEV), three pairs of specific primers were designed for PEDV gene sequence. The first pair of primers amplified 198bp and 148bp fragments of ORF3 gene from wild virus strain (classical strain, variant strain) and vaccine strain, the second pair of primers amplified S gene 429bp fragment of classical strain and vaccine strain, and the third pair of primers amplified S274bp fragment of mutant strain. After optimization of reaction conditions, a multiplex RT-PCR detection method was established to detect and distinguish PEDV classical strains, variant strains and vaccine strains simultaneously. This method can specifically detect PEV, but has no cross reaction with other important pathogens of swine, such as FMDV / CSFV, PRRV / TGEV / PRO / VGV _ 2 / PRV, and the detection limit of recombinant plasmid standard is 2.62 脳 10 ~ (-2) copi _ (2) / L / L, and the result of repeated test is uniform and consistent. The method was used to detect 120 cases of PEDV positive in 336 clinical samples, including 96 variant strains, 21 vaccine strains and 3 mixed infection strains. The results showed that the multiplex RT-PCR assay developed in this study was highly specific, sensitive and reproducible, and could be used for rapid identification and epidemiological investigation of classical PEDV strains, variant strains and vaccine strains.
【作者單位】： 廣西動物疫病預防控制中心;廣西大學動物科學技術學院;
【基金】：廣西水產(chǎn)畜牧科技項目(桂漁牧科201528017) 廣西科學研究與技術開發(fā)計劃項目(桂科轉14125004-22)
【分類號】：S852.651

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