本文選題：延邊黃牛 + 膽綠素還原酶��； 參考：《中國獸醫(yī)學報》2017年05期

【摘要】：為了克隆延邊黃牛膽綠素還原酶(Biliverdin reductase,BVR)的CDNA序列后在大腸桿菌中表達、純化并進行鑒定。本試驗根據(jù)黃牛、馬和東北虎BVR基因的cDNA序列設(shè)計引物,通過3′和5′RACE方法獲得延邊黃牛BVR基因全長cDNA序列。之后構(gòu)建pET-28a-BVR重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化到E.coli BL21(DE3)中表達并進行純化。通過分光光度法檢測BVR酶的活性。結(jié)果顯示,所獲得的延邊黃牛BVR基因cDNA含有1個完整的開放閱讀框,該cDNA序列閱讀框由891個核苷酸組成,編碼296個氨基酸。用BLAST和ClustalW軟件進行同源性分析,與牛、馬和東北虎的核苷酸相似性分別為98.0%,88.0%和87.0%。SDS-PAGE鑒定其相對分子質(zhì)量為32 560。分光光度法檢測BVR具有催化膽綠素還原為膽紅素的活性。結(jié)果表明,通過克隆表達獲得了有活性的延邊黃牛BVR酶蛋白,為膽紅素的進一步大量制備提供理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to clone the CDNA sequence of Biliverreductin reductase (Biliverreductase BVR) from Yanbian cattle, it was expressed in Escherichia coli, purified and identified. Primers were designed according to the cDNA sequence of BVR gene of yellow cattle, horse and Siberian tiger, and the full-length cDNA sequence of BVR gene of Yanbian cattle was obtained by 3 'and 5'RACE methods. PET-28a-BVR recombinant plasmid was then constructed and transformed into E.coli BL21 (DE3) for expression and purification. The activity of BVR enzyme was detected by spectrophotometry. The results showed that the BVR gene cDNA of Yanbian cattle contained a complete open reading frame, which consisted of 891 nucleotides and encoded 296 amino acids. The nucleotide similarity with cattle, horse and Amur tiger was 98.0% and 88.0%, respectively, and the relative molecular weight of Amur tiger was 32560 by using BLAST and ClustalW software. BVR has catalytic activity of reducing bilirubin to bilirubin by spectrophotometry. The results showed that the active BVR protein of Yanbian cattle was obtained by cloning and expression, which provided a theoretical basis for the further preparation of bilirubin.
【作者單位】： 延邊大學農(nóng)學院;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(31160501)
【分類號】：S823.81

【參考文獻】

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本文編號：1863631