發(fā)布時(shí)間：2018-05-08 17:18

  本文選題：大約克豬 + SLA-��； 參考：《微生物學(xué)通報(bào)》2017年02期

【摘要】：【目的】研究大約克豬SLA-3(SLA-3-YDY)蛋白在體外與口蹄疫病毒多肽的復(fù)性�！痉椒ā吭O(shè)計(jì)SLA-3-YDY胞外區(qū)引物,PCR擴(kuò)增目的基因,并將此片段克隆至p MD19-T Simple Vector上,雙酶切篩選出陽(yáng)性克隆并測(cè)序,測(cè)序正確的片段連接至表達(dá)載體p ET-21a(+)上,轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)BL21細(xì)胞中,IPTG誘導(dǎo),SDS-PAGE檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)。超聲破碎菌體,提取包涵體蛋白,通過稀釋復(fù)性法將重鏈SLA-3-YDY、輕鏈sβ2m和口蹄疫病毒多肽Hu52按摩爾比1:1:1加入復(fù)性液,經(jīng)分子篩層析純化并檢測(cè)復(fù)合物是否復(fù)性�！窘Y(jié)果】PCR擴(kuò)增獲得SLA-3-YDY目的基因,經(jīng)測(cè)序陽(yáng)性克隆序列與原序列一致。經(jīng)酶切鑒定,證明目的基因與p ET-21a(+)載體成功連接,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)、SDS-PAGE檢測(cè),顯示目的基因表達(dá),大小約33 k D,SDS-PAGE檢測(cè)包涵體蛋白,證明包涵體蛋白大小與菌體蛋白大小一致。分子篩及SDS-PAGE檢測(cè)發(fā)現(xiàn),通過稀釋復(fù)性法實(shí)現(xiàn)了重鏈、輕鏈和多肽的復(fù)性,并得到蛋白復(fù)合物SLA-3-Hu52-sβ2m(45 k D)�！窘Y(jié)論】構(gòu)建了大約克豬SLA-3原核表達(dá)載體,獲得目的蛋白,實(shí)現(xiàn)了口蹄疫病毒多肽Hu52與SLA-3重鏈及輕鏈的復(fù)性,為今后進(jìn)一步研究SLA-3的結(jié)構(gòu)和功能奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:[objective] to study the renaturation of SLA-3 SLA-3-YDYY protein from Yorkshire pigs with foot-and-mouth disease virus polypeptide in vitro. [methods] the target gene was amplified by designing primers for SLA-3-YDY extracellular region and cloned into p MD19-T Simple Vector. The positive clones were screened by double enzyme digestion and sequenced. The correct sequence was ligated to the expression vector pET-21a (), and the expression of the target protein was detected by SDS-PAGE induced by IPTG in Escherichia coli receptive BL21 cells. The inclusion body protein was extracted by ultrasonic fragmentation. The heavy chain SLA-3-YDY, the light chain s 尾 2m and the foot-and-mouth disease virus polypeptide Hu52 were added into the refolding solution at 1:1:1 molar ratio by dilution renaturation. The target gene of SLA-3-YDY was amplified by PCR, and the positive clone sequence was consistent with the original sequence. Restriction endonuclease analysis showed that the target gene was successfully linked to pET-21a () vector and detected by SDS-PAGE induced by IPTG. The target gene was detected by SDS-PAGE. The size of inclusion body protein was detected by 33 kD SDS-PAGE. It was proved that the size of inclusion body protein was the same as that of bacterial protein. Molecular sieve and SDS-PAGE detection showed that the heavy chain, light chain and polypeptide were renatured by dilution renaturation method, and the protein complex SLA-3-Hu52-s 尾 2m(45 kD was obtained. [conclusion] the prokaryotic expression vector of Yorkshire porcine SLA-3 was constructed and the target protein was obtained. The refolding of FMDV polypeptide Hu52 and SLA-3 heavy chain and light chain was realized, which laid a foundation for further study on the structure and function of SLA-3.
【作者單位】： 大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31172304) 遼寧省教育廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目(No.LZ2015003)~~
【分類號(hào)】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 阿蓮;口蹄疫及其預(yù)防[J];中國(guó)農(nóng)墾;2001年06期

2 何冬梅;我國(guó)成功構(gòu)建感染性口蹄疫病毒粒子[J];當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè);2004年08期

3 凌連軍;張培君;李永清;龔玉梅;;O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆及原核表達(dá)載體構(gòu)建[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年08期

4 劉萍;叢國(guó)正;楊孝樸;沈小燕;邵軍軍;獨(dú)軍政;林彤;王光華;易華山;�；菔|;謝慶閣;;O型口蹄疫病毒OA58株3C基因的克隆與真核表達(dá)[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2007年01期

5 ;全球O型口蹄疫病毒流行逐年遞減[J];北方牧業(yè);2012年15期

6 ;口蹄疫新病毒系正威脅近東和歐洲[J];國(guó)外畜牧科技;1999年03期

7 胡騎;信愛國(guó);李華春;;O型口蹄疫病毒Real-time PCR檢測(cè)方法的建立[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年01期

8 盧曾軍,劉在新;口蹄疫病毒研究概況[J];中國(guó)獸醫(yī)科技;2003年02期

9 張燦,韓春來,柏亞鐸,汪明;O型口蹄疫病毒VP1基因和牛集落刺激因子基因的融合表達(dá)[J];中國(guó)獸醫(yī)科技;2005年07期

10 張曉鳳;;口蹄疫病毒的基因分型[J];畜牧與飼料科學(xué)(奶牛版);2006年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 馬全英;祝秀梅;劉萍;呂志慧;王凡;劉學(xué)榮;黃銀君;牟克斌;;口蹄疫病毒感染機(jī)制的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國(guó)微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國(guó)獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

2 黃紅亮;陳煥春;金梅林;覃雅麗;;用抗O型口蹄疫病毒的單克隆抗體建立雙抗夾心ELISA方法[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第五屆理事會(huì)第二次全體會(huì)議暨防檢疫專業(yè)委員會(huì)第7次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2002年

3 劉棋;金寧一;鄭敏;郭建剛;李華明;蘭彬;鄒聯(lián)斌;鄧朝陽(yáng);;兩株不同基因型的O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆及表達(dá)[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

4 段舒怡;姜平;李玉峰;馬蘇;杜以軍;楊曉偉;;O型口蹄疫病毒VP1蛋白單克隆抗體的制備與生物學(xué)特性鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆理事會(huì)第二次會(huì)議暨教學(xué)專業(yè)委員會(huì)第六屆代表大會(huì)論文集[C];2006年

5 鄒興啟;范運(yùn)峰;張懷宇;鄭明舉;盧受f;張愛民;馬愛榮;趙啟祖;;O型口蹄疫病毒嵌合體的構(gòu)建及病毒拯救[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

6 王雯慧;�；菔|;黃立軍;馬軍武;林彤;邵軍軍;馬金玲;劉在新;劉湘濤;陳懷濤;謝慶閣;;O型口蹄疫病毒Akesu／58在牛體內(nèi)的定位及其致病機(jī)理的研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十四次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專業(yè)委員會(huì)第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

7 魯會(huì)軍;金寧一;鄭敏;韓松;張洪勇;李昌;金擴(kuò)世;;A型口蹄疫病毒多表位基因的表達(dá)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆理事會(huì)第二次會(huì)議暨教學(xué)專業(yè)委員會(huì)第六屆代表大會(huì)論文集[C];2006年

8 泰鵬;謝雪岑;孫艷琪;;一種簡(jiǎn)便的澄清口蹄疫病毒懸液的方法[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

9 袁淑珍;高艷華;張燕紅;王麗君;;口蹄疫病毒的克隆[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

10 鄭敏;金寧一;魯會(huì)軍;韓松;金擴(kuò)世;李昌;;O型口蹄疫病毒VP1嵌合基因的構(gòu)建及原核表達(dá)[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 任林柱;口蹄疫病毒反向遺傳技術(shù)體系及分子標(biāo)記疫苗株的構(gòu)建[D];吉林大學(xué);2007年

2 赫冬梅;豬瘟和口蹄疫病毒抗原基因在植物內(nèi)的重組與表達(dá)[D];浙江大學(xué);2005年

3 陳豪泰;口蹄疫基因工程病毒拯救及其舌下免疫研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

4 李勇;口蹄疫病毒3C（D）蛋白與宿主細(xì)胞因子Fascin-1相互作用研究[D];武漢大學(xué);2010年

5 王鵬雁;口蹄疫病毒干擾RNA轉(zhuǎn)基因小鼠模型的構(gòu)建[D];石河子大學(xué);2008年

6 王冬梅;口蹄疫病毒VP1及多抗原表位基因在植物表達(dá)的研究[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

7 王媛媛;口蹄疫病毒P1基因和乙型腦炎病毒E基因在轉(zhuǎn)基因水稻中的表達(dá)及其免疫原性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

8 陳維灶;RNAi抑制口蹄疫病毒復(fù)制與感染的相關(guān)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王云鵬;實(shí)驗(yàn)條件下山羊絨洗凈因素對(duì)口蹄疫病毒的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

2 尚延麗;口蹄疫病毒A/GDMMCHA2013株VP1H-2d限制性CTL表位預(yù)測(cè)與鑒定[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 張偉;穩(wěn)定表達(dá)αvβ3細(xì)胞系的建立及其對(duì)口蹄疫病毒易感性的評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 姜韶東;淺析口蹄疫病毒O/GSLX/CHN/2010株特征性S片段對(duì)病毒生物學(xué)特性的影響[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

5 曹麗娟;口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白2B、3A對(duì)細(xì)胞凋亡的影響及干擾3D基因?qū)Σ《疽种频挠^察[D];石河子大學(xué);2015年

6 王國(guó)慶;口蹄疫病毒2B蛋白拮抗RIG-I抗病毒作用研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 劉華南;口蹄疫病毒3B蛋白單克隆抗體制備、抗原位點(diǎn)鑒定及競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的初步建立[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 敖大;口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白2B的離子孔道特性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 朱志堅(jiān);口蹄疫病毒利用未知受體入侵宿主細(xì)胞的內(nèi)吞路徑研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

10 范許許;自噬復(fù)合體ATG5-ATG12促進(jìn)Ⅰ型干擾素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)口蹄疫病毒復(fù)制的影響[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

，

本文編號(hào)：1862299