本文選題：大約克豬 + SLA-　； 參考：《微生物學通報》2017年02期

【摘要】：【目的】研究大約克豬SLA-3(SLA-3-YDY)蛋白在體外與口蹄疫病毒多肽的復性�！痉椒ā吭O計SLA-3-YDY胞外區(qū)引物,PCR擴增目的基因,并將此片段克隆至p MD19-T Simple Vector上,雙酶切篩選出陽性克隆并測序,測序正確的片段連接至表達載體p ET-21a(+)上,轉化大腸桿菌感受態(tài)BL21細胞中,IPTG誘導,SDS-PAGE檢測目的蛋白的表達。超聲破碎菌體,提取包涵體蛋白,通過稀釋復性法將重鏈SLA-3-YDY、輕鏈sβ2m和口蹄疫病毒多肽Hu52按摩爾比1:1:1加入復性液,經(jīng)分子篩層析純化并檢測復合物是否復性�！窘Y果】PCR擴增獲得SLA-3-YDY目的基因,經(jīng)測序陽性克隆序列與原序列一致。經(jīng)酶切鑒定,證明目的基因與p ET-21a(+)載體成功連接,經(jīng)IPTG誘導表達、SDS-PAGE檢測,顯示目的基因表達,大小約33 k D,SDS-PAGE檢測包涵體蛋白,證明包涵體蛋白大小與菌體蛋白大小一致。分子篩及SDS-PAGE檢測發(fā)現(xiàn),通過稀釋復性法實現(xiàn)了重鏈、輕鏈和多肽的復性,并得到蛋白復合物SLA-3-Hu52-sβ2m(45 k D)�！窘Y論】構建了大約克豬SLA-3原核表達載體,獲得目的蛋白,實現(xiàn)了口蹄疫病毒多肽Hu52與SLA-3重鏈及輕鏈的復性,為今后進一步研究SLA-3的結構和功能奠定基礎。
[Abstract]:[objective] to study the renaturation of SLA-3 SLA-3-YDYY protein from Yorkshire pigs with foot-and-mouth disease virus polypeptide in vitro. [methods] the target gene was amplified by designing primers for SLA-3-YDY extracellular region and cloned into p MD19-T Simple Vector. The positive clones were screened by double enzyme digestion and sequenced. The correct sequence was ligated to the expression vector pET-21a (), and the expression of the target protein was detected by SDS-PAGE induced by IPTG in Escherichia coli receptive BL21 cells. The inclusion body protein was extracted by ultrasonic fragmentation. The heavy chain SLA-3-YDY, the light chain s 尾 2m and the foot-and-mouth disease virus polypeptide Hu52 were added into the refolding solution at 1:1:1 molar ratio by dilution renaturation. The target gene of SLA-3-YDY was amplified by PCR, and the positive clone sequence was consistent with the original sequence. Restriction endonuclease analysis showed that the target gene was successfully linked to pET-21a () vector and detected by SDS-PAGE induced by IPTG. The target gene was detected by SDS-PAGE. The size of inclusion body protein was detected by 33 kD SDS-PAGE. It was proved that the size of inclusion body protein was the same as that of bacterial protein. Molecular sieve and SDS-PAGE detection showed that the heavy chain, light chain and polypeptide were renatured by dilution renaturation method, and the protein complex SLA-3-Hu52-s 尾 2m(45 kD was obtained. [conclusion] the prokaryotic expression vector of Yorkshire porcine SLA-3 was constructed and the target protein was obtained. The refolding of FMDV polypeptide Hu52 and SLA-3 heavy chain and light chain was realized, which laid a foundation for further study on the structure and function of SLA-3.
【作者單位】： 大連大學生命科學與技術學院;中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所;
【基金】：國家自然科學基金項目(No.31172304) 遼寧省教育廳重點實驗室項目(No.LZ2015003)~~
【分類號】：S852.65

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