發(fā)布時間：2018-05-06 22:24

  本文選題：禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒 + 外源基因與Env融合��； 參考：《揚州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科禽類C反轉(zhuǎn)錄病毒。REV主要引起以網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞增生為主要特征的一組綜合征,包括急性網(wǎng)狀細胞增生癥、矮小綜合征和淋巴組織及其它組織的慢性腫瘤增生性疾病。反轉(zhuǎn)錄病毒作為外源基因表達及傳遞載體已有大量研究報道,而REV能否作為外源基因表達載體鮮有報道。本研究首先在REV病毒基因組Env基因的N端插入綠色熒光蛋白基因EGFP,構(gòu)建并拯救出表達EGFP的REV病毒的基礎(chǔ)上,將H9流感病毒HA上部分抗原表位插入Env基因的N端,拯救出表達HA抗原表位蛋白的REV病毒,并進行相關(guān)病毒特性研究。1、表達綠色熒光蛋白的REV病毒的構(gòu)建與拯救為嘗試REV能否作為病毒載體表達外源基因,并探究外源基因插入位點,本研究利用重組酶ExnaseTMⅡ克隆技術(shù)以及反向遺傳操作技術(shù),首先將外源基因EGFP插入REV病毒基因組Env基因N端構(gòu)建外源基因與Env蛋白融合表達的REV傳染性克隆,命名為rREV-EGFP-Env。將rREV-EGFP-Env傳染性克隆轉(zhuǎn)染DF1細胞進行了病毒拯救,并通過熒光證明獲得了表達EGFP-Env的重組REV病毒。研究結(jié)果表明,REV基因組Env基因N端能作為外源基因插入位點用來進行外源基因與Env蛋白的融合表達。這為進一步開發(fā)REV作為病毒疫苗載體表達外源基因提供了可能。同時,能夠表達EGFP-Env的重組REV病毒的獲得可以準確有效的跟蹤REV病毒的復(fù)制,為研究REV的致病機理和組織嗜性提供有力工具和生物材料。2、表達H9流感病毒HA抗原表位蛋白的REV病毒拯救及其特性為了進一步探究REV作為病毒疫苗載體表達外源基因的可能性,將H9流感病毒HA部分抗原表位插入REV病毒基因組Env基因N端,成功構(gòu)建HA抗原表位與Env蛋白融合表達的REV傳染性克隆,命名為rREV-HAep-Env。將rREV-HAep-Env轉(zhuǎn)染DF1進行了病毒拯救,并通過PCR、IFA和Western blot分析證明獲得了表達HAep-Env的重組REV,命名為REV-HA。體外生長曲線測定表明,REV-HA在DF1細胞上的生長特性與REV野毒類似。雞感染性試驗發(fā)現(xiàn),在感染七周內(nèi)REV組和REV-HA組的雞體重變化情況類似�？贵w檢測發(fā)現(xiàn),感染后第二周,REV組和REV-HA組均能產(chǎn)生REV抗體,到第三周抗體水平達到高峰。在感染后第七周,進行了 H9流感病毒的攻毒試驗。棉拭排毒測定發(fā)現(xiàn),在感染后第二天,REV-HA組的排毒量明顯低于REV組和PBS組。這些結(jié)果表明,融合表達H9流感病毒HA抗原表位的REV-HA具有與REV野毒類似生物學(xué)特性,同時提示REV作為病毒疫苗載體表達外源基因的可行性。
[Abstract]:Avian reticuloendotheliosis virus (Rev) is a group of syndromes mainly characterized by reticuloendothelial cell proliferation, including acute reticular cell hyperplasia, which is mainly caused by C retrovirus of the family Retroviridae. Dwarf syndrome and chronic neoplastic disease in lymphoid and other tissues. It has been reported that retrovirus can be used as expression vector of exogenous gene, but whether REV can be used as expression vector of exogenous gene is rarely reported. In this study, the N terminal of Env gene of REV virus was inserted into the N terminal of Env gene of REV virus, and then the REV virus expressing EGFP was constructed and saved. Some epitopes of H9 influenza virus HA were inserted into the N terminal of Env gene. The REV virus expressing HA epitope protein was rescued, and the related virus characteristics were studied. 1. The construction and rescue of REV virus expressing green fluorescent protein was to try to find out whether REV could be used as a viral vector to express foreign gene. The insertion site of exogenous gene was investigated, and the recombinant enzyme ExnaseTM 鈪，

本文編號：1854175