本文選題：梅花鹿 + 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)��； 參考：《農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)》2017年07期

【摘要】：鹿茸是一個(gè)天然的細(xì)胞生長(zhǎng)因子庫(kù),鹿體最活躍的部位是鹿茸頂端組織,里面含有大量的生長(zhǎng)因子。這些生長(zhǎng)因子可為鹿茸的臨床作用研究提供生物化學(xué)基礎(chǔ),多種生長(zhǎng)因子對(duì)鹿茸的增殖具有重要的促進(jìn)作用。為了獲得具有生物學(xué)活性的蛋白質(zhì),本研究將梅花鹿(Cervus nippon)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)成熟肽基因與p ET-30a連接構(gòu)建VEGF基因原核表達(dá)載體,鑒定成功后,將p ET-30a-VEGF轉(zhuǎn)入Rosetta大腸桿菌(Escherichia coli)感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)(0.6 mmol/L異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG),20℃,16 h),并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)檢測(cè)。目的蛋白通過(guò)Ni-Agarose柱試劑盒進(jìn)行純化,通過(guò)復(fù)性以獲得生物學(xué)活性。再應(yīng)用咪唑藍(lán)(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)法檢測(cè)重組蛋白對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞(mouse embryonic fibroblast cell line,NIH3T3)的影響。鑒定結(jié)果顯示,成功構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒;SDSPAGE電泳結(jié)果表明,在Rosetta中成功檢測(cè)到融合蛋白的表達(dá);MTT法結(jié)果顯示,不同濃度的重組蛋白均能促進(jìn)NIH3T3的增殖,并且隨著濃度的增加,細(xì)胞的增殖速度也隨之加快;其中,蛋白添加量為200 ng/m L、孵育48 h時(shí),增殖效果較為明顯。研究結(jié)果將為深入探討VEGF在鹿茸快速增殖過(guò)程中的功能和調(diào)控機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Velvet antler is a natural cell growth factor bank, the most active part of deer body is the apical tissue of deer antler, which contains a lot of growth factors. These growth factors can provide biochemical basis for the clinical study of velvet antler, and many growth factors play an important role in promoting the proliferation of velvet antler. In order to obtain the protein with biological activity, the mature peptide gene of vascular endothelial growth factor (VEGF) of Cervus nippon was ligated with p ET-30a to construct the prokaryotic expression vector of VEGF gene. P ET-30a-VEGF was transferred into Rosetta Escherichia coli competent cells to express 0.6 mmol/L isopropyl 尾 -Dthiopyranoside (尾 -D-1-thiogalactopyranoside). The expression product was detected by sodium dodecyl sulfate and polyacrylamide gel electrophoresis with sodium dodecyl sulfate and polyacrylamide gel electrophoresis. Objective protein was purified by Ni-Agarose column kit and renatured to obtain biological activity. Then the effect of recombinant protein on mouse embryonic fibroblast cell lineage NIH3T3 was detected by the method of imidazolium 5-dimethyl-2-thiazolyl- 2-diphenyl-2-H-tetrazolium bromidet MTTs. The results showed that the expression of the fusion protein was detected successfully in Rosetta by SDS-PAGE. The results showed that the recombinant protein of different concentrations could promote the proliferation of NIH3T3, and with the increase of the concentration, the recombinant protein could promote the proliferation of NIH3T3. The proliferation rate of the cells was accelerated with the addition of 200 ng/m / L protein, and the proliferation effect was obvious when incubated for 48 h. The results will provide experimental basis for further study on the function and regulation mechanism of VEGF in the process of rapid growth of velvet antler.
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31572372和No.30972083) 國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No.201510193034)
【分類(lèi)號(hào)】：S825

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1842466