本文選題：梅花鹿 + 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)　； 參考：《農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報》2017年07期

【摘要】：鹿茸是一個天然的細胞生長因子庫,鹿體最活躍的部位是鹿茸頂端組織,里面含有大量的生長因子。這些生長因子可為鹿茸的臨床作用研究提供生物化學基礎(chǔ),多種生長因子對鹿茸的增殖具有重要的促進作用。為了獲得具有生物學活性的蛋白質(zhì),本研究將梅花鹿(Cervus nippon)血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)成熟肽基因與p ET-30a連接構(gòu)建VEGF基因原核表達載體,鑒定成功后,將p ET-30a-VEGF轉(zhuǎn)入Rosetta大腸桿菌(Escherichia coli)感受態(tài)細胞進行誘導表達(0.6 mmol/L異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG),20℃,16 h),并對表達產(chǎn)物進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)檢測。目的蛋白通過Ni-Agarose柱試劑盒進行純化,通過復性以獲得生物學活性。再應(yīng)用咪唑藍(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)法檢測重組蛋白對小鼠成纖維細胞(mouse embryonic fibroblast cell line,NIH3T3)的影響。鑒定結(jié)果顯示,成功構(gòu)建原核表達質(zhì)粒;SDSPAGE電泳結(jié)果表明,在Rosetta中成功檢測到融合蛋白的表達;MTT法結(jié)果顯示,不同濃度的重組蛋白均能促進NIH3T3的增殖,并且隨著濃度的增加,細胞的增殖速度也隨之加快;其中,蛋白添加量為200 ng/m L、孵育48 h時,增殖效果較為明顯。研究結(jié)果將為深入探討VEGF在鹿茸快速增殖過程中的功能和調(diào)控機理提供實驗依據(jù)。
[Abstract]:Velvet antler is a natural cell growth factor bank, the most active part of deer body is the apical tissue of deer antler, which contains a lot of growth factors. These growth factors can provide biochemical basis for the clinical study of velvet antler, and many growth factors play an important role in promoting the proliferation of velvet antler. In order to obtain the protein with biological activity, the mature peptide gene of vascular endothelial growth factor (VEGF) of Cervus nippon was ligated with p ET-30a to construct the prokaryotic expression vector of VEGF gene. P ET-30a-VEGF was transferred into Rosetta Escherichia coli competent cells to express 0.6 mmol/L isopropyl 尾 -Dthiopyranoside (尾 -D-1-thiogalactopyranoside). The expression product was detected by sodium dodecyl sulfate and polyacrylamide gel electrophoresis with sodium dodecyl sulfate and polyacrylamide gel electrophoresis. Objective protein was purified by Ni-Agarose column kit and renatured to obtain biological activity. Then the effect of recombinant protein on mouse embryonic fibroblast cell lineage NIH3T3 was detected by the method of imidazolium 5-dimethyl-2-thiazolyl- 2-diphenyl-2-H-tetrazolium bromidet MTTs. The results showed that the expression of the fusion protein was detected successfully in Rosetta by SDS-PAGE. The results showed that the recombinant protein of different concentrations could promote the proliferation of NIH3T3, and with the increase of the concentration, the recombinant protein could promote the proliferation of NIH3T3. The proliferation rate of the cells was accelerated with the addition of 200 ng/m / L protein, and the proliferation effect was obvious when incubated for 48 h. The results will provide experimental basis for further study on the function and regulation mechanism of VEGF in the process of rapid growth of velvet antler.
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學生命科學學院;
【基金】：國家自然科學基金項目(No.31572372和No.30972083) 國家級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(No.201510193034)
【分類號】：S825

【參考文獻】

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1 李春義;;鹿茸完全再生機制研究進展[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報;2017年01期

2 趙靜;閆偉;雷平;;VEGF和PEDF對血管滲透性影響的研究進展[J];中國社區(qū)醫(yī)師;2016年31期

3 閆語多;韓香玉;吳雷;胡薇;;鹿茸組織microRNA的研究進展[J];中國畜牧雜志;2016年21期

4 李玉靈;趙華;任秀寶;;VEGF及其受體與免疫抑制細胞關(guān)系的研究進展[J];山東醫(yī)藥;2016年17期

5 李駿;劉旭東;;淺談VEGF的相關(guān)研究進展[J];中國繼續(xù)醫(yī)學教育;2016年09期

6 胡薇;牛永梅;司博;王蒙蒙;閆語多;;原核表達梅花鹿IGF-1成熟多肽對雞CEF和CEK細胞增殖的影響[J];吉林農(nóng)業(yè)科學;2015年04期

7 才蕾;矯麗媛;王繼華;唐時幸;;甲胎蛋白的原核表達及復性優(yōu)化[J];生物技術(shù)通報;2015年01期

8 王叢笑;宋軍營;張振強;;VEGF在阿爾茨海默病中相關(guān)作用機制的研究[J];中醫(yī)學報;2015年01期

9 孟星宇;李婷;李沐;劉寧;田玉華;胡薇;;梅花鹿IGF-1的原核表達與純化[J];西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版);2012年07期

10 胡薇;孟星宇;田玉華;劉寧;;梅花鹿IGF1全長cDNA克隆及在鹿茸組織的表達[J];東北林業(yè)大學學報;2011年11期

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【共引文獻】

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1 劉慧;劉振;王權(quán)威;董振;楊雪雯;王桂武;楊福合;李春義;;雄激素刺激AP發(fā)育前后差異蛋白篩選及DIGE分析[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報;2017年07期

2 王大濤;張偉;巴恒星;李春義;;腫瘤相關(guān)因子CD9在鹿茸干細胞中的表達檢測及功能分析[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報;2017年07期

3 胡薇;孫寶龍;張蕾;張宇鵬;高雙娜;劉藍月;韓香玉;;梅花鹿VEGF的原核表達與純化[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報;2017年07期

4 趙海平;褚文輝;劉振;張偉;谷海軍;李春義;;干擾干細胞離子通道對鹿茸形態(tài)發(fā)生的影響[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報;2017年07期

5 李卉;張雨潔;姚藍;毛新民;;兩色金雞菊乙酸乙酯提取物對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜VEGF和ICAM1表達的影響[J];新疆醫(yī)科大學學報;2017年04期

6 張偉;劉佳;董振;李春義;;利用qRT-PCR技術(shù)篩選鹿茸生長中心細胞與鹿茸干細胞內(nèi)參基因[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報;2017年05期

7 張飛燕;王振華;潘康成;唐慧琴;谷笑笑;李偉;;藏豬IGF-1成熟肽基因的克隆及原核表達[J];華北農(nóng)學報;2017年01期

8 韓香玉;吳炎;李璐;閆語多;胡薇;;梅花鹿VEGF基因的克隆及其在鹿茸頂端組織的表達[J];吉林農(nóng)業(yè)大學學報;2017年04期

9 李俊玲;高世海;馬妹花;吳海濤;牛會先;;亞低溫對腦出血大鼠血腫周圍神經(jīng)營養(yǎng)因子和血管新生的影響[J];解剖學雜志;2016年06期

10 閆語多;韓香玉;吳雷;胡薇;;鹿茸組織microRNA的研究進展[J];中國畜牧雜志;2016年21期

【二級參考文獻】

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1 王權(quán)威;董振;王桂武;楊福合;劉慧;李春義;;鹿茸再生相關(guān)蛋白研究進展[J];生物技術(shù)通報;2015年08期

2 張偉;褚文輝;李春義;;鹿茸成骨過程及其相關(guān)調(diào)控機制研究進展[J];中國農(nóng)學通報;2015年08期

3 陳凡波;尹建元;劉競研;楊玉霞;孫丹丹;劉繼華;;鹿茸、鹿心和鹿血中胰島素樣生長因子-Ⅰ的制備及含量檢測[J];中藥材;2014年12期

4 才蕾;矯麗媛;王繼華;唐時幸;;甲胎蛋白的原核表達及復性優(yōu)化[J];生物技術(shù)通報;2015年01期

5 王叢笑;宋軍營;張振強;;VEGF在阿爾茨海默病中相關(guān)作用機制的研究[J];中醫(yī)學報;2015年01期

6 董振;褚文輝;趙海平;劉振;王桂武;李春義;;鹿茸再生及其蛋白質(zhì)組學研究進展[J];中國組織工程研究;2014年24期

7 魯曉萍;王大濤;孫紅梅;褚文輝;趙海平;章秀婷;李春義;;鹿茸發(fā)育的組織來源及其相互作用機制研究進展[J];特產(chǎn)研究;2014年01期

8 朱曉健;李翊;游泳;李青;曾辰;仲照東;鄒萍;;外源性VEGF促小鼠造血干細胞動員[J];中國實驗血液學雜志;2014年01期

9 李婷;李沐;孟星宇;劉寧;胡薇;;microRNA介導的IGF1基因沉默對鹿茸軟骨細胞增殖的影響[J];西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版);2013年11期

10 劉秀俠;楊雄;陳紅英;;單鏈抗體2F5和4E10的原核表達、純化和鑒定[J];生物技術(shù)通報;2013年10期

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3 黃偉;梅花鹿茸的成分和對血壓及免疫功能影響的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2013年

4 王春雷;鹿茸分裂層細胞的分離培養(yǎng)及褪黑激素對間充質(zhì)細胞的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2013年

5 劉振;鹿茸干細胞中PI3K/AKT信號通路的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2013年

6 苗永剛;鹿茸多肽對軟骨細胞cofilin信號通路調(diào)控作用的研究[D];長春中醫(yī)藥大學;2013年

7 劉美辰;經(jīng)典信號傳導系統(tǒng)在鹿茸生長發(fā)育過程中的表達變化研究[D];長春中醫(yī)藥大學;2013年

8 劉海龍;梅花鹿鹿茸快速生長過程中轉(zhuǎn)錄組測序分析及差異表達基因篩選[D];長春中醫(yī)藥大學;2013年

9 孫常文;FGF23與SUMO融合蛋白在大腸桿菌中高效表達及其純化的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2011年

10 韓玉帥;TGF-β家族及其受體在梅花鹿茸角中的表達與調(diào)節(jié)[D];吉林大學;2011年

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2 哲名家;張淼濤;云濤;王玢tx;劉光清;;兔巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆與原核表達[J];西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版);2012年04期

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5 張桂紅;林海波;詹國英;廖明;任濤;羅開健;曹偉勝;徐成剛;江經(jīng)緯;辛朝安;;豬白細胞介素-6基因的非融合原核表達研究[J];中國預防獸醫(yī)學報;2006年04期

6 戴華;鄭佳玉;陳俊華;潘志明;焦新安;;雞α干擾素基因的原核表達及其活性測定[J];中國預防獸醫(yī)學報;2009年10期

7 宋海韜;王力剛;沈興家;黃勇;趙巧玲;;家蠶丙酮酸脫氫酶激酶基因的克隆與原核表達[J];江西農(nóng)業(yè)學報;2011年10期

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2 丁夢蝶;魯?shù)?王紅寧;田浪;陽泰;張毅;樊汶樵;郭自成;;禽傳染性支氣管炎病毒多基因串聯(lián)表位抗原的原核表達研究[A];四川省動物學會第九次會員代表大會暨第十屆學術(shù)研討會論文集[C];2011年

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4 隋桂琴;左玲;王桂云;;人堿性成纖維細胞生長因子的原核表達[A];中國眼底病論壇·全國眼底病專題學術(shù)研討會論文匯編[C];2008年

5 黃斯勇;梁英民;韓驊;李國輝;伍艷蘭;康志杰;何飛;張萍;徐恒;劉利;;人Detla-like4ext-93-217原核表達、純化及蛋白活性檢測[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

6 張紅;劉志國;屈伸;;人源受體相關(guān)蛋白的原核表達優(yōu)化及功能檢測[A];湖北省暨武漢生物化學與分子生物學學會第八屆會員代表大會和第十五次學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2004年

7 袁志棟;王志亮;劉雨田;吳曉東;劉海生;;水貂朊蛋白前體基因的克隆與原核表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第六次研討會論文集[C];2005年

8 王士友;張耀洲;;一個新的家蠶基因的克隆、原核表達及純化[A];華東六省一市生物化學與分子生物學學會2006年學術(shù)交流會論文集[C];2006年

9 伍艷蘭;黃斯勇;牛曉麗;張麗;陳茹菲;何飛;張萍;梁英民;劉利;;人Delta-like4ext-93-217原核表達、純化及蛋白活性檢測[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

10 馬文濤;閆若潛;吳志明;劉光輝;盛敏;謝彩華;;豬白細胞介素-6的原核表達及其生物學活性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第四次豬病防控學術(shù)研討會論文集[C];2010年

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4 張大鵬;VP60蛋白的原核表達、抗體制備及VP60基因轉(zhuǎn)化的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2012年

5 張少斌;豌豆肌動蛋白異型體（PEAc1）的原核表達及其藻熒光探針的研制[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2004年

6 尹國華;利用Red重組系統(tǒng)構(gòu)建dsRNA原核表達體系抗煙草花葉病毒的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2009年

7 韓凌霞;豬圓環(huán)病毒2型基因的原核表達與單克隆抗體的制備及感染性分子克隆的動物接種試驗[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2003年

8 于揚;重組人源GPx4及其模擬物的原核表達、結(jié)構(gòu)與功能的研究[D];吉林大學;2013年

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4 鐘樹懷;豬囊尾蚴膜聯(lián)蛋白的原核表達及其免疫反應(yīng)性分析[D];貴陽醫(yī)學院;2015年

5 孫明潭;豬繁殖與呼吸綜合征病毒河北地方株ORF7基因的原核表達及ELISA方法的建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學;2015年

6 張良斌;天祝白牦牛KAP家族基因克隆、原核表達及其在皮膚中的表達分析[D];西北民族大學;2015年

7 達小強;牦牛轉(zhuǎn)鐵蛋白基因克隆與原核表達[D];西北民族大學;2015年

8 高翠娥;飛蝗2個CYP450轉(zhuǎn)基因果蠅品系對殺蟲劑的敏感性及原核表達[D];山西大學;2015年

9 吳雨航;布氏桿菌病間接ELISA方法的建立及吉林省梅花鹿主要養(yǎng)殖地區(qū)鹿布病血清學調(diào)查[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2015年

10 姜旭;百合無癥病毒16kDα基因的克隆、原核表達及亞細胞定位[D];大連理工大學;2015年

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本文編號：1842466