本文選題：豬IFN-α + 口蹄疫病毒��； 參考：《中國(guó)畜牧獸醫(yī)》2017年05期

【摘要】：為探討口蹄疫病毒多基因及豬α干擾素(IFN-α)基因共表達(dá)真核質(zhì)粒進(jìn)入臨床試驗(yàn)的可行性,本試驗(yàn)用PCR方法擴(kuò)增了口蹄疫病毒P12A3C及部分2B基因(P12X3C)和豬IFN-α基因,克隆到真核表達(dá)載體pBudCE4.1中,經(jīng)雙酶切鑒定后,將重組質(zhì)粒pBudCE4.1-P12X3C-IFN-α轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞中,觀察目的基因的表達(dá),并將重組質(zhì)粒免疫豚鼠,檢測(cè)豚鼠的血清抗體水平、中和抗體滴度及T淋巴細(xì)胞增殖情況。結(jié)果顯示,經(jīng)酶切鑒定及DNA序列分析成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pBudCE4.1-P12X3C-IFN-α,轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞后,通過(guò)Western blotting、間接免疫熒光試驗(yàn)鑒定證實(shí)重組質(zhì)粒能有效表達(dá)。ELISA結(jié)果顯示,重組質(zhì)粒pBudCE4.1-P12X3C-IFN-α比重組質(zhì)粒pBudCE4.1-P12X3C能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生更高水平的抗口蹄疫病毒的血清抗體,且中和抗體滴度也高于重組質(zhì)粒pBudCE4.1-P12X3C組。MTT法檢測(cè)結(jié)果表明,重組質(zhì)粒pBudCE4.1-P12X3C-IFN-α組淋巴細(xì)胞增殖可達(dá)15%,而重組質(zhì)粒pBudCE4.1-P12X3C組則為11%。攻毒后重組質(zhì)粒pBudCE4.1-P12X3C-IFN-α組和滅活疫苗組保護(hù)率達(dá)100%,高于重組質(zhì)粒pBudCE4.1-P12X3C組的80%。本試驗(yàn)成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pBudCE4.1-P12X3CIFN-α,豬IFN-α作為佐劑可有效輔助口蹄疫DNA疫苗提高動(dòng)物體內(nèi)的免疫反應(yīng)。
[Abstract]:In order to investigate the feasibility of co-expressing eukaryotic plasmids of foot-and-mouth disease virus (FMDV) polygene and porcine interferon 偽 (IFN- 偽) gene into clinical trials, the P12A3C and some 2B genes of foot-and-mouth disease virus (FMDV) P12X3C) and porcine IFN- 偽 gene were amplified by PCR. The recombinant plasmid pBudCE4.1-P12X3C-IFN- 偽 was transfected into BHK-21 cells to observe the expression of the target gene, and the recombinant plasmid was immunized to guinea pigs. Neutralizing antibody titer and T lymphocyte proliferation. The results showed that the recombinant plasmid pBudCE4.1-P12X3C-IFN- 偽 was successfully constructed by restriction endonuclease digestion and DNA sequence analysis. After transfection of pBudCE4.1-P12X3C-IFN- 偽, the recombinant plasmid was confirmed by Western blotting and indirect immunofluorescence assay. Compared with the recombinant plasmid pBudCE4.1-P12X3C, the recombinant plasmid pBudCE4.1-P12X3C-IFN- 偽 could induce a higher level of serum antibody against FMDV, and the titer of neutralizing antibody was higher than that of pBudCE4.1-P12X3C group. The lymphocyte proliferation of the recombinant plasmid pBudCE4.1-P12X3C-IFN- 偽 was 15%, while that of the recombinant plasmid pBudCE4.1-P12X3C group was 11%. The protective rate of recombinant plasmid pBudCE4.1-P12X3C-IFN- 偽 and inactivated vaccine group was 100, higher than that of recombinant plasmid pBudCE4.1-P12X3C group. In this experiment, the recombinant plasmid pBudCE4.1-P12X3CIFN- 偽 was successfully constructed. Pig IFN- 偽 as adjuvant can effectively assist DNA vaccine of foot-and-mouth disease to improve the immune response in vivo.
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室;江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：十三五國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2016YFD0501503) 甘肅省科技支撐計(jì)劃(1604NKCA045-2) 國(guó)家生豬現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(CARS-36-06B)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65

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