本文選題：兔出血癥病毒 + 適配體��； 參考：《中國動物傳染病學(xué)報》2017年02期

【摘要】：為篩選出兔出血癥病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)衣殼蛋白VP60特異性核酸適配體,建立新型的兔出血癥(rabbit hemorrhagic disease,RHD)檢測方法,本研究構(gòu)建了一個長80 nt的隨機(jī)寡核苷酸文庫。以固定在PVDF膜上的VP60為靶分子,使用消減SELEX技術(shù)(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)進(jìn)行20輪的篩選,以生物素標(biāo)記的次級文庫作為"一抗",以辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶親和素作為"二抗",對文庫進(jìn)行Western blot鑒定,結(jié)果表明第20輪文庫存在可特異性的識別VP60的核酸序列。隨機(jī)選取第20輪文庫的46條序列克隆、測序,得到20個高度同源序列,同時對46個適配體再次鑒定,最終得到3個特異性識別VP60的適配體。
[Abstract]:In order to screen rabbit hemorrhagic disease virus capsid protein VP60 specific aptamer and to establish a new method for detecting rabbit haemorrhagic disease hemorrhagic, a 80 NT random oligonucleotide library was constructed in this study. Using VP60 immobilized on PVDF membrane as target molecule, subtractive SELEX technique was used for 20 rounds of screening, using subtractive evolution of ligands by exponential enrichment. The secondary library labeled by biotin was used as the "first antibody" and the horseradish peroxidase labeled chain enzyme avidin was used as the "second antibody" to identify the library. The results showed that there was a specific nucleic acid sequence to recognize VP60 in the 20th round of the library. 46 sequences of the 20th round library were randomly selected, and 20 highly homologous sequences were obtained by sequencing. At the same time, 46 aptamers were identified again, and finally 3 aptamers with specific recognition of VP60 were obtained.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)科研項(xiàng)目
【分類號】：S852.65

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本文編號：1809267