本文選題：豬圓環(huán)病毒 + 乳腺表達(dá)載體�。� 參考：《中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年09期

【摘要】：為獲得穩(wěn)定表達(dá)豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)orf2基因的奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞,將PCV-2 orf2基因與篩選基因neo表達(dá)框串聯(lián)插入到pBC1質(zhì)粒,得到重組的真核表達(dá)載體pBC1-orf2-neo。然后采用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞(gFFs),經(jīng)G418篩選獲得具有穩(wěn)定抗性的陽性gFFs細(xì)胞株。RT-PCR分析顯示,在獲得的陽性gFFs細(xì)胞株中能夠擴(kuò)增出689bp的orf2基因和1 953bp的neo表達(dá)框,與預(yù)期結(jié)果相符。Western blot分析顯示,獲得了約37 000的表達(dá)產(chǎn)物,且能夠與兔抗PCV-2Cap蛋白抗體發(fā)生反應(yīng)。結(jié)果表明,orf2基因成功整合到山羊胎兒成纖維細(xì)胞染色體上并能夠正確表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物具有良好的反應(yīng)原性,這為構(gòu)建分泌Cap蛋白的奶山羊乳腺生物反應(yīng)器奠定了理論和物質(zhì)基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to obtain goat fetal fibroblasts stably expressing porcine circovirus type 2 PCV-2 orf2 gene, the PCV-2 orf2 gene and the screening gene neo expression frame were inserted into the pBC1 plasmid in tandem to obtain the recombinant eukaryotic expression vector pBC1-orf2-neo. Then the recombinant plasmid was transfected into dairy goat fetal fibroblasts by liposome-mediated transfection. Positive gFFs cell lines with stable resistance were obtained by G418 screening. RT-PCR analysis showed that the recombinant plasmid had stable resistance. The orf2 gene of 689bp and the neo expression box of 1 953bp could be amplified from the positive gFFs cell line. Western blot analysis showed that about 37,000 expression products were obtained and could react with rabbit anti- protein antibody. The results showed that the gene of orf2 was successfully integrated into the chromosomes of goat fetal fibroblasts and could be expressed correctly. This laid a theoretical and material foundation for the construction of milk goat mammary gland bioreactor secreting Cap protein.
【作者單位】： 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院;甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院;
【基金】：蘭州市科技局人才創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)資助項(xiàng)目(2015-RC-7) 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室專項(xiàng)資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：S852.651

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本文編號(hào)：1776502