本文選題：豬繁殖與呼吸綜合征 + GP5蛋白�。� 參考：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一種病毒性傳染病,它的傳播給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來的經(jīng)濟損失是不可估量的。如何有效的預(yù)防和治療該病是各國研究的熱點,比較有效的檢測方法包括RT-PCR、ELISA檢測等,ELISA檢測快速、有效的優(yōu)點使其能夠廣泛的應(yīng)用。接種滅活疫苗是我國預(yù)防該病的主要方法,但是單一的結(jié)構(gòu)蛋白或單一的非結(jié)構(gòu)蛋白的ELISA檢測不能夠判斷抗體的產(chǎn)生是由滅活疫苗引起還是感染野毒引起的,這就會影響該病的檢測結(jié)果,如何建立更加準確、有效的ELISA檢測方法是目前的當務(wù)之急。GP5蛋白是檢測PRRSV抗體的主要靶蛋白,Nsp7基因在非結(jié)構(gòu)蛋白中相對保守,不同毒株之間差異較小,它的這個特點可以使其在檢測不同毒株刺激機體產(chǎn)生的抗體時保持較高的特異性。接種滅活疫苗和感染PRRSV都可以刺激機體產(chǎn)生針對結(jié)構(gòu)蛋白的抗體,所以只用結(jié)構(gòu)蛋白作檢測抗原會影響檢測結(jié)果的準確性。本研究在單一結(jié)構(gòu)蛋白ELISA檢測的基礎(chǔ)上增加一種非結(jié)構(gòu)蛋白以達到能準確判斷抗體來源的ELISA檢測方法,利用PCR技術(shù),從PRRSV分離株中擴增出GP5和Nsp7基因,將目的基因與表達載體pET28a連接,將構(gòu)建的重組表達載體pET28a-GP5、pET28a-Nsp7轉(zhuǎn)化到表達菌株BL21(DE3)中,測序鑒定。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達,表達產(chǎn)物再進行SDS-PAGE分析。結(jié)果表明成功表達了GP5蛋白和Nsp7蛋白,表達蛋白經(jīng)His Trap FF純化柱純化,然后進行Western blot分析,證明表達的重組蛋白均具有良好的抗原性。優(yōu)化ELISA檢測的各種條件,成功建立GP5-Nsp7-ELISA檢測方法。
[Abstract]:Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRSs) is a viral infectious disease, and the economic loss caused by its spread to the global pig industry is incalculable. How to prevent and treat the disease effectively is a hot topic in many countries. The more effective detection methods include RT-PCR- Elisa and so on. The advantages of rapid and effective Elisa make it widely used. Inoculation with inactivated vaccine is the main method to prevent the disease in China, but the ELISA detection of single structural protein or single non-structural protein can not determine whether the production of antibody is caused by inactivated vaccine or infected wild virus. This will affect the detection results of the disease, how to establish a more accurate, effective ELISA detection method is the most urgent task at present. GP5 protein is the main target protein for detecting PRRSV antibody, Nsp7 gene is relatively conservative in non-structural proteins. The difference between different strains is small, which makes it more specific in detecting antibodies produced by different strains. Inoculation of inactivated vaccine and infection of PRRSV can stimulate the body to produce antibodies against structural proteins, so using structural proteins as antigen will affect the accuracy of detection results. On the basis of ELISA detection of single structural protein, a non-structural protein was added to determine the origin of antibody by ELISA detection method. GP5 and Nsp7 genes were amplified from PRRSV isolate by PCR technique. The target gene was ligated with the expression vector pET28a and the recombinant expression vector pET28a-GP5pET28a-Nsp7 was transformed into the expression strain BL21DDE3 and sequenced. The expression was induced by IPTG, and the expression product was analyzed by SDS-PAGE. The results showed that GP5 protein and Nsp7 protein were successfully expressed. The expressed proteins were purified by His Trap FF column and then analyzed by Western blot. The results showed that the expressed recombinant proteins had good antigenicity. The conditions of ELISA detection were optimized and the GP5-Nsp7-ELISA detection method was established successfully.
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

【共引文獻】

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本文編號：1776017