本文選題：豬胸膜肺炎放線桿菌 + 細(xì)菌分裂��； 參考：《湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：豬傳染性胸膜肺炎是由豬胸膜肺炎放線桿菌感染引起的一種接觸性呼吸道疾病,抗生素治療容易產(chǎn)生耐藥性,因此尋找新的藥物靶點并設(shè)計新的藥物非常重要。方法：1、根據(jù)已報道的細(xì)菌細(xì)胞分裂的相關(guān)基因的核苷酸序列,通過BLAST了解這些基因在豬胸膜肺炎放線桿菌的分布；根據(jù)有關(guān)序列設(shè)計引物,通過PCR擴(kuò)增并測序驗證這些基因在豬胸膜肺炎放線桿菌是否存在完整的ORF。2、根據(jù)GenBank已報道的App ftsZ的有關(guān)序列設(shè)計引物,從血清3型克隆了ftsZ基因,并進(jìn)行有關(guān)的生物信息學(xué)分析。采用DNA重組技術(shù)將其重組到載體pET28-(a)表達(dá),提取重組蛋白免疫小鼠制成免疫血清,West blot鑒定細(xì)菌是否表達(dá)該蛋白。結(jié)果：本實驗共篩選出胸膜肺炎放線桿菌細(xì)胞分裂相關(guān)的21種基因,其中大部分分裂相關(guān)基因存在于各個血清型中,少數(shù)幾個基因在不同的血清型有差異。App的ftsZ基因測序、生物信息學(xué)分析和細(xì)菌提取物的West blot鑒定發(fā)現(xiàn),App的ftsZ基因全長1212bp,含一個開放閱讀框(ORF),由起始密碼子ATG至終止密子TAA,編碼403個氨基酸。編碼蛋白的理論分子量為42.6kD,等電點為4.72。與APP的血清1型、4型、5型、8型、10型、11型相似度為96%。系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)App不同血清型的ftsZ基因在進(jìn)化上屬于同一分支。蛋白質(zhì)序列分析發(fā)現(xiàn),FtsZ蛋白在APP各血清型的同源性甚高。結(jié)論：本研究為進(jìn)一步研究胸膜肺炎放線桿菌細(xì)胞分裂機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。ftsZ可能成為廣譜藥物的靶點。
[Abstract]:Porcine infectious pleuropneumonia is a kind of contact respiratory disease caused by Actinobacillus pleuropneumoniae infection. Antibiotic therapy is easy to produce drug resistance, so it is very important to find new drug targets and design new drugs.Methods: according to the nucleotide sequences of reported genes related to bacterial cell division, the distribution of these genes in Actinobacillus pleuropneumoniae was studied by BLAST, and primers were designed according to the relevant sequences.PCR amplification and sequencing were used to verify the existence of complete ORF.2gene in Actinobacillus pleuropneumoniae. According to the sequence of App ftsZ reported by GenBank, primers were designed to clone ftsZ gene from serotype 3, and the related bioinformatics analysis was carried out.The recombinant protein was expressed by DNA recombination technique. The recombinant protein was extracted and immunized to immunize mice to determine whether or not the recombinant protein was expressed by the bacteria.Results: a total of 21 genes related to cell division of Actinobacillus pleuropneumoniae were screened, most of which were found in each serotype, and a few genes were sequenced in different serotypes.Bioinformatics analysis and West blot analysis of bacterial extracts revealed that the ftsZ gene was 1212bp in length, containing an open reading frame (ORF), encoding 403 amino acids from the start codon (ATG) to the terminal codon (TAA).The theoretical molecular weight and isoelectric point of the encoded protein are 42.6 KD and 4.72 respectively.The similarity between APP serotype 1, serotype 1, serotype 4, serotype 1, serotype 1, serotype 1, serotype 1, serotype 1, serotype 1, serotype 1, serotype 1, serotype 4Phylogenetic analysis showed that the ftsZ gene of different serotypes of App belonged to the same branch in evolution.Protein sequence analysis showed that FtsZ protein had high homology in APP serotypes.Conclusion: this study lays a foundation for further study on the cell division mechanism of Actinobacillus pleuropneumoniae. FtsZ may be the target of broad-spectrum drugs.
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.28

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本文編號：1771859