本文選題：豬肺泡巨噬細(xì)胞 + PRRSV　； 參考：《中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年04期

【摘要】：為研究豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)與豬肺泡巨噬細(xì)胞(porcine alveolar macrophages,PAM)蛋白質(zhì)間相互的作用,本研究使用SMART技術(shù)成功構(gòu)建了豬肺泡巨噬細(xì)胞酵母雙雜交cDNA文庫(kù)。首先提取PAM總RNA,使用SMART RACE法經(jīng)LD PCR合成雙鏈cDNA,運(yùn)用SMART技術(shù),通過(guò)同源重組的方法將雙鏈cDNA與pGADT7-Rec質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化進(jìn)酵母Y187感受態(tài),再利用營(yíng)養(yǎng)缺陷的方法在SD/-Leu平板上篩選陽(yáng)性克隆,最終構(gòu)建的文庫(kù)滴度達(dá)到了6.96×10~7 CFU/mL,重組率初步計(jì)算達(dá)到95%,插入片段范圍在200~2 000bp。本研究為PRRSV致病蛋白的篩選以及相關(guān)疾病的研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to study the interaction between porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSVV) and porcine alveolar macrophages (PAM) protein, a two-hybrid cDNA library of porcine reproductive and respiratory syndrome virus was successfully constructed using SMART technique.At first, PAM was extracted and synthesized by LD PCR using SMART RACE method. The double-stranded cDNA and pGADT7-Rec plasmid were co-transformed into yeast Y187 by homologous recombination by SMART technique, and then the positive clones were screened on the SD/-Leu plate by the method of nutrition deficiency.The titer of the constructed library reached 6.96 脳 10 ~ (7) CFU / mL, the recombination rate reached 95%, and the inserted fragment ranged from 200 ~ 2 000 BP.This study laid a foundation for the screening of PRRSV pathogenic proteins and the study of related diseases.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古民族大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31460662)
【分類號(hào)】：S858.28

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本文編號(hào)：1767672