本文選題：牛皰疹病毒1型 + 磷脂酶C��； 參考：《揚州大學》2017年碩士論文

【摘要】：牛皰疹病毒1型(Bovineherpesvirustype1,BoHV-1)是傳染性牛鼻氣管炎(Infectious bovinerhinotracheitis,IBR)的病原體。BoHV-1感染的臨床癥狀主要表現(xiàn)為黏膜炎、繁殖障礙和上呼吸道炎癥反應(yīng)。該病毒感染引起的免疫抑制易導(dǎo)致其它細菌和病毒的繼發(fā)性感染,從而引起牛呼吸道疾病綜合征(bovinerespiratorydiseasecomplex,BRDC),最終導(dǎo)致高死亡率發(fā)生。該病毒廣泛分布于世界各地給養(yǎng)牛業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失。炎癥反應(yīng)在BoHV-1感染和BRDC中起重要的作用,目前BoHV-1感染誘導(dǎo)炎癥產(chǎn)生的報道較少。本研究通過研究BoHV-1感染如何調(diào)控炎癥相關(guān)的細胞信號MAPK通路(mitogen-activated protein kinase pathway)的活性和炎性介質(zhì)分子 ROS(reactive oxidative species)的產(chǎn)生,來初步揭示該病毒誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)發(fā)生的分子機制。本研究主要內(nèi)容分為以下四個部分:1.BoHV-1感染調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)介質(zhì)分子ROS產(chǎn)生的分子機制在多種病毒感染過程中ROS對于病毒復(fù)制以及病毒誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)都起重要作用。本研究就BoHV-1感染MDBK細胞過程中ROS、GSH(glutathione)、線粒體膜電位(mitochondrialmembranepotential,MMP)以及ATP水平分別進行檢測,發(fā)現(xiàn)該病毒的侵入、病毒蛋白的表達和/或DNA復(fù)制均可以提高ROS水平,過量產(chǎn)生的ROS有助于BoHV-1復(fù)制。BoHV-1感染導(dǎo)致細胞內(nèi)GSH水平顯著降低,這可能是介導(dǎo)ROS產(chǎn)生的分子機制之一。加入外源性GSH可以顯著抑制病毒復(fù)制,GSH與抗皰疹病毒藥物阿昔洛韋(Acyclovir,ACV)聯(lián)合使用具有協(xié)同的抗病毒作用。BoHV-1感染MDBK細胞中通過顯著降低MMP和ATP水平,從而對線粒體造成損傷。有趣的是抑制ROS水平能夠有效的恢復(fù)BoHV-1感染導(dǎo)致MMP降低的現(xiàn)象。本研究表明BoHV-]感染依賴ROS的產(chǎn)生對線粒體造成損傷,最終破壞ATP的生成是該病毒感染潛在的致病機制之一。2.BoHV-1感染調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)信號MAPK通路已知BoHV-1感染過程中能夠激活MAPK/Erk1/2通路,MAPK通路除了 ERK1/2信號之外,還包括p38MAPK和JNK兩個信號,它們在多種因素誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中都起重要作用。BoHV-1感染是否調(diào)控p38MAPK和JNK信號,目前未見報道。本研究首次發(fā)現(xiàn)BoHV-1感染MDBK細胞的過程中能夠激活p38MAPK和JNK信號通路以及JNK的下游信號c-Jun,另外JNK信號的激活有助于病毒復(fù)制。BoHV-1感染激活MAPK信號通路并不依賴ROS的產(chǎn)生,這不同于單純皰疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)。本研究表明BoHV-1感染過程調(diào)控MAPK通路,該調(diào)控過程與ROS產(chǎn)生無關(guān)。3.PLC信號調(diào)控多因素誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)磷脂酶C家族(phospholipase C,PLC)/Ca2+信號調(diào)控多種生物學過程。單核/巨噬細胞在炎癥反應(yīng)過程起重要作用。人單核細胞系U937細胞在phorbol-12-myristate-13-acetate(PMA)刺激下可以分化成巨噬樣細胞dU937。本研究以U937細胞為模型,研究PLC信號在單核細胞向巨噬細胞分化、LPS和流感病毒H1N1誘導(dǎo)的促炎性細胞因子表達中發(fā)揮的作用。研究發(fā)現(xiàn)PLC抑制劑U73122能顯著抑制PMA誘導(dǎo)的細胞粘附相關(guān)信號Pyk2和paxillin的表達和活性,從而抑制單核細胞的粘附;U73122能顯著降低巨噬細胞表面marker CD163的表達。可見PLC信號調(diào)控PMA誘導(dǎo)的單核細胞U937向巨噬細胞的分化。LPS和流感病毒H1N1都能誘導(dǎo)促炎性細胞因子的大量表達從而介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)U73122能顯著抑制LPS刺激dU937細胞和小鼠腹腔巨噬細胞所誘導(dǎo)的促炎性細胞因子TNF-α和IL-1β的表達;U73122也能顯著抑制流感病毒H1N1感染dU937細胞誘導(dǎo)的細胞因子TNF-α,IL-6,MIP-1α的表達、ROS產(chǎn)生,此外PLC信號還與NF-κB信號活化有關(guān)。這表明PLC信號參與多因素誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。4.BoHV-1感染調(diào)控PLC信號及PLC介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)鑒于上述研究發(fā)現(xiàn)PLC信號調(diào)控多因素誘導(dǎo)的促炎性細胞因子和炎性介質(zhì)分子的表達,及炎性相關(guān)信號NF-κB的活性,而BoHV-1感染過程中是否調(diào)節(jié)PLC信號,目前并不清楚。本研究發(fā)現(xiàn)BoHV-1感染激活PLC有利于病毒復(fù)制,激活的PLC信號介導(dǎo)ROS產(chǎn)生及p38MAPK和Erk1/2信號的激活。表明PLC信號在BoHV-1感染過程中起重要作用,病毒促進ROS產(chǎn)生和激活p38MAPK和Erk1/2信號在一定程度上依賴于PLC信號。推測PLC信號對于BoHV-1感染以及病毒誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)可能起重要作用。
[Abstract]:Bovine herpesvirus type 1 (Bovineherpesvirustype1, BoHV-1) is an infectious bovine rhinotracheitis (Infectious bovinerhinotracheitis, IBR) the clinical symptoms of the pathogen.BoHV-1 infection mainly manifested as mucositis, reproductive disorders and upper respiratory tract inflammation. Inhibition of easily lead to secondary infection of other bacteria and viruses caused by immune the virus causing bovine respiratory the disease syndrome (bovinerespiratorydiseasecomplex, BRDC), and finally lead to high mortality. The virus is widely distributed in the world to the cattle industry to bring huge economic losses. The inflammatory reaction plays an important role in BoHV-1 infection and BRDC infection, currently reported less inflammation induced by BoHV-1 generated. This research is how to control the inflammation related cell signal MAPK passage through the infection of BoHV-1 (mitogen-activated protein kinase pathway) and the activity of inflammatory mediators ROS (reactive oxidative species) generation, to reveal the molecular mechanism of the virus induced inflammation. The main contents of this study includes the following four parts: 1.BoHV-1 infection related molecular mechanisms that regulate the inflammatory medium molecule ROS produced in a variety of virus infection in ROS has played an important role in virus replication and virus induced inflammatory reaction this study. BoHV-1 infection of MDBK cells in ROS, GSH (glutathione), mitochondrial membrane potential (mitochondrialmembranepotential, MMP) and ATP levels were detected and found the virus invasion, the expression of viral proteins and / or DNA replication can improve the level of ROS, excessive production of ROS contribute to the replication of BoHV-1.BoHV-1 infection leads to the intracellular level of GSH decreased significantly, which may be one of the molecular mechanisms mediated by ROS. Exogenous GSH can significantly inhibit virus replication, GSH and anti herpes drugs A Silowe (Acyclovir, ACV) combined with antiviral effect of.BoHV-1 co infection of MDBK cells by MMP and ATP levels decreased significantly, resulting in damage to the mitochondria. Interestingly the inhibition of ROS can effectively restore BoHV-1 infection leads to the decrease of MMP. The results indicated that BoHV-] infection on ROS the damage to the mitochondria, to generate the final damage ATP the virus infection is one of the pathogenic mechanisms underlying.2.BoHV-1 infection can activate MAPK/Erk1/2 pathway in regulation of inflammation related signaling pathway known MAPK BoHV-1 infection process, in addition to the ERK1/2 signal pathway of MAPK, including p38MAPK and JNK two signal are inflammatory reaction induced by them in a variety of factors the important role of whether.BoHV-1 infection control of p38MAPK and JNK signal, has not been reported. This is the first study found that BoHV-1 infected with M Can activate p38MAPK and JNK signaling pathway and downstream of JNK signal c-Jun DBK cells, and the activation of JNK signaling contributes to the replication of virus infection of.BoHV-1 activation of MAPK signaling pathway is not dependent on the production of ROS, which is different from the herpes simplex virus type 1 (herpes simplex virus 1, HSV-1). The results indicated that BoHV-1 infection process regulation of the MAPK pathway and the regulation process of ROS to produce inflammation independent phospholipase C.3.PLC signaling induced by multi factor family (phospholipase C, PLC) /Ca2+ signaling regulates many biological processes. Monocytes / macrophages play an important role in the inflammatory reaction process. Human monocytic U937 cells in phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) can stimulate in this study, differentiate into macrophage like cells dU937. to U937 cells as a model, the research of PLC signal differentiation to macrophages in mononuclear cells, LPS and H1N1 induced by influenza virus Play the proinflammatory cytokine expression. The study found that the expression and activity of PLC inhibitor U73122 can significantly inhibit PMA induced cell adhesion related signal Pyk2 and paxillin, thereby inhibiting the adhesion of monocytes; U73122 can significantly reduce the expression of marker CD163. A large number of macrophage surface expression of monocyte U937 visible PLC signaling PMA to induce macrophage differentiation of.LPS and H1N1 influenza virus can induce proinflammatory cytokine which mediates inflammatory reaction. The study found that U73122 can significantly inhibit LPS induced dU937 cells and mouse peritoneal macrophages stimulated by inflammatory cytokines TNF- alpha and IL-1 beta U73122 expression also significantly inhibited; influenza H1N1 virus infection of dU937 cells induced by cytokines TNF-, IL-6, expression of MIP-1 alpha ROS, PLC and NF- in signal kappa B signaling activation. This indicates that the PLC signal .4.BoHV-1 is involved in the inflammatory response induced by infection factors regulating inflammatory response mediated by PLC signal and PLC in view of the study found that the expression of PLC signal regulation of proinflammatory cytokines and inflammatory mediators induced by multiple molecular factors, and inflammatory related signal NF- kappa B activity, and BoHV-1 whether PLC signal regulated in dyeing process at present, is not clear. This study found that BoHV-1 infection activates PLC to virus replication, activation of PLC signaling mediated by activated ROS and p38MAPK and Erk1/2 signals. The results indicated that PLC signal plays an important role in the process of BoHV-1 infection, the virus promotes ROS production and activation of p38MAPK and Erk1/2 signal depends on the PLC signal. That PLC signal for BoHV-1 infection and virus induced inflammatory reaction may play an important role.

【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S858.23

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本文編號：1758566