本文選題：馬鹿β-防御素- + RACE　； 參考：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報》2017年02期

【摘要】：為了研究馬鹿β-防御素-1(Red deerβ-defensin-1,redBD-1)基因的結(jié)構(gòu)與功能,揭示該基因的組織表達(dá)規(guī)律。本研究利用PCR結(jié)合RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技術(shù)從馬鹿舌黏膜中克隆redBD-1基因的cDNA全長序列并對其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,同時采用Real-time quantitative PCR(RT-qPCR)技術(shù)檢測該基因在各組織的表達(dá)情況。結(jié)果表明,redBD-1基因的cDNA全長序列為455bp,開放閱讀框(ORF)為192bp,編碼64個氨基酸。生物信息學(xué)分析表明,redBD-1蛋白的理論分子量為6.94ku,有10個帶正電荷的氨基酸殘基,無帶負(fù)電荷的氨基酸殘基,理論等電點為10.85。預(yù)測redBD-1蛋白有一個分泌信號肽結(jié)構(gòu),無跨膜區(qū),主要在細(xì)胞外發(fā)揮生理功能;6個保守的半胱氨酸殘基分別以Cys1-Cys5、Cys2-Cys4和Cys3-Cys6連接形成3個分子內(nèi)二硫鍵;成熟蛋白的三級結(jié)構(gòu)是由β-折疊、延伸和無規(guī)則卷曲構(gòu)成。redBD-1基因編碼的氨基酸序列同源性最高的是梅花鹿β-防御素(siBD-1)為98.4%,其次是水牛腸β-防御素(BEBD)為92.2%,與人β-防御素-2(HBD-2)同源性最低僅為35.9%。RT-qPCR結(jié)果得出,redBD-1在被檢器官中均有表達(dá),在消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)以及生殖系統(tǒng)的大部分器官表達(dá)量較高,肝、腎和脾等實質(zhì)性器官表達(dá)量相對較低。本試驗為今后深入研究防御素基因功能以及馬鹿黏膜免疫系統(tǒng)提供理論依據(jù)。
[Abstract]:In order to study the structure and function of the 尾 -defensin-1 red deer 尾 -defensin-1 (BD-1) gene of Wapiti, the expression pattern of the gene was revealed.In this study, the full-length cDNA sequence of the redBD-1 gene was cloned from the tongue mucosa of Wapiti by PCR and RACE(Rapid-amplification of cDNA ends, and its bioinformatics analysis was carried out. The expression of the redBD-1 gene in various tissues was detected by Real-time quantitative PCRRT-qPCR.The results showed that the full-length cDNA sequence of the BD-1 gene was 455bpand the ORF of ORAF was 192bpencoding 64 amino acids.Bioinformatics analysis showed that the theoretical molecular weight of BD-1 protein was 6.94ku. there were 10 positively charged amino acid residues and no negative charge amino acid residues, and the theoretical isoelectric point was 10.85.It was predicted that the redBD-1 protein had a secretory signal peptide structure with no transmembrane domain and mainly played a physiological function outside the cell, and that six conserved cysteine residues were joined by Cys1-Cys5Cys2-Cys4 and Cys3-Cys6 to form three intramolecular disulfide bonds.The tertiary structure of a mature protein is a 尾 -fold.The highest homology of amino acid sequence of the. RedBD-1 gene encoding by extension and irregular curl is 98.4% for sibbd 1, 92. 2 for buffalo intestinal 尾 -defensin, and 92. 2 for human 尾 -defensin-2HbD-2. The result shows that the lowest homology with human 尾 -defensin-2 HBD-2 is only 35.9%.RT-qPCR.The expression of redBD-1 was found in all the tested organs.In digestive system, respiratory system and reproductive system, the expression of most organs is higher, but the expression of parenchymal organs such as liver, kidney and spleen is relatively low.This study provides a theoretical basis for further study of defensin gene function and mucosal immune system of Wapiti.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;農(nóng)業(yè)部動物疾病臨床診療技術(shù)重點實驗室;
【基金】：內(nèi)蒙古教育廳人才基金
【分類號】：S825

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8 王t

本文編號：1754935