本文選題：奶牛 + 小腸上皮細(xì)胞　； 參考：《中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報》2017年06期

【摘要】：為研究小肽轉(zhuǎn)運蛋白對小肽轉(zhuǎn)運和吸收機制提供細(xì)胞模型,在體外建立原代奶牛小腸上皮細(xì)胞分離的方法,采用Ⅰ型膠原酶和中性蛋白酶混合消化液對奶牛小腸組織進(jìn)行消化,通過2%山梨醇進(jìn)行密度梯度離心以去除單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和肌細(xì)胞;用刮除法、相差消化法和96孔板單克隆方法來純化奶牛小腸上皮細(xì)胞,從細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞角蛋白18免疫熒光染色和小腸上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白來鑒定奶牛腸上皮細(xì)胞。結(jié)果表明:1)采用Ⅰ型膠原酶和中性蛋白酶聯(lián)合消化奶牛小腸組織,通過2%山梨醇密度梯度離心可以獲得大量的細(xì)胞團(tuán)且48h發(fā)生貼壁,但是細(xì)胞貼壁不牢。2)48h之后細(xì)胞團(tuán)進(jìn)一步向外輻射生長出細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)典型的上皮細(xì)胞和鋪路石形態(tài)。5~7d細(xì)胞處于對數(shù)生長期,細(xì)胞大量增值,一部分成纖維細(xì)胞與小腸上皮細(xì)胞夾雜生長。3)通過96孔板能夠單克隆奶牛小腸上皮細(xì)胞,細(xì)胞呈現(xiàn)均一的鋪路石形態(tài)。4)奶牛小腸上皮細(xì)胞角蛋白18鑒定為陽性,熒光顯微鏡下能夠發(fā)出綠色熒光。5)通過RT-PCR能夠檢測到奶牛小腸上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白E-鈣黏蛋白、堿性磷酸酶和腸肽酶的表達(dá),成功建立了奶牛小腸上皮細(xì)胞的分離和培養(yǎng)方法。
[Abstract]:In order to study the mechanism of small peptide transporter on the transport and absorption of small peptides, a method of isolation of primary small intestinal epithelial cells from dairy cattle was established in vitro. The mixed digestive fluid of type I collagenase and neutral protease was used to digest the small intestinal tissue of dairy cattle.Density gradient centrifugation with 2% sorbitol was used to remove monocytes, lymphocytes and myocytes, and bovine small intestinal epithelial cells were purified by scraping method, phase difference digestion method and 96-well plate monoclonal method.Cytokeratin 18 immunofluorescence staining and small intestinal epithelial specific marker protein were used to identify bovine intestinal epithelial cells.The results showed that a large number of cell clusters could be obtained by 2% sorbitol density gradient centrifugation by digesting the small intestine tissue with type I collagenase and neutral protease.However, after 48 hours of cell attachment, the cell mass further radiated out, and the cell morphology showed typical epithelial cells and paving stone morphology. The cells were in logarithmic growth stage, and the cells increased in a large number.Some fibroblasts and small intestinal epithelial cells mixed with growth. 3) through 96 well plate can monoclonal bovine small intestinal epithelial cells, the cells show a uniform paving stone morphology. 4) Cow small intestinal epithelial cell keratin 18 was identified as positive.The expression of E-cadherin, alkaline phosphatase and enteropeptidase was detected by RT-PCR.The method of isolation and culture of bovine intestinal epithelial cells was established successfully.
【作者單位】： 揚州大學(xué)動物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(31572430)
【分類號】：S823

【參考文獻(xiàn)】

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相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1753189