本文選題：小鵝瘟病毒 + 血清學(xué)調(diào)查��； 參考：《仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：廣東省是水禽養(yǎng)殖大省,然而小鵝瘟疫情仍不時(shí)發(fā)生并造成重大經(jīng)濟(jì)損失。針對小鵝瘟仍然缺乏高效的治療藥物和相關(guān)生物制品。針對小鵝瘟的防控主要是通過對產(chǎn)蛋前種鵝或種番鴨進(jìn)行免疫,使雛鵝或雛番鴨獲得母源抗體。所以對鵝和番鴨進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查可以有助于了解廣東省小鵝瘟免疫水平的高低。本實(shí)驗(yàn)通過采集廣東省內(nèi)主要鵝養(yǎng)殖生產(chǎn)地的養(yǎng)殖場的種鵝、雛鵝、種番鴨和雛番鴨共529份血液樣本,應(yīng)用ELISA方法對部分樣本進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示共有135份采集樣品中小鵝瘟抗體呈陽性率,陽性率為25.52%。其中粵北地區(qū)的抗體陽性率只有27.94%;粵西地區(qū)的抗體陽性率為27.11%;粵東地區(qū)的抗體陽性率為17.74%;珠三角地區(qū)的抗體陽性率為25.75%。通過進(jìn)一步分析表明,廣東省內(nèi)采集的370份鵝血清中共檢測到70份樣品陽性,鵝群中小鵝瘟抗體水平為18.92%,采集的159份番鴨血清中共檢測65份樣品為陽性,番鴨群中小鵝瘟抗體水平為40.88%。在311份種鵝(種番鴨)血清中共檢測到95份樣品陽性,種鵝(種番鴨)體內(nèi)小鵝瘟抗體陽性率為41.21%;在218份雛鵝(雛番鴨)血清中共檢測到40份樣品陽性,雛鵝(雛番鴨)體內(nèi)抗體陽性率為29.63%。針對目前市場小鵝瘟生物制品良莠不齊的現(xiàn)象,防控小鵝瘟病毒的相關(guān)生物制品的研發(fā)至關(guān)重要。本研究將小鵝瘟病毒顆粒表達(dá)抗原決定簇的主要成分VP3中的特異性抗原部分進(jìn)行擴(kuò)增,連接到NoV P-particle載體,構(gòu)建并獲得重組質(zhì)粒,命名為P-particle-VP3。將構(gòu)建的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至BL21感受態(tài)中并進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),發(fā)現(xiàn)在加入的IPTG濃度為1m M/m L時(shí)表達(dá)效果最好,在IPTG濃度為1mM/mL時(shí)誘導(dǎo)5h時(shí)蛋白表達(dá)量達(dá)到最高峰。相關(guān)研究表明,NoV P-particle可作為新型的抗原呈遞平臺,能夠提高抗原呈遞效率,增強(qiáng)抗原的抗原性和免疫原性,有效加強(qiáng)生物機(jī)體的免疫應(yīng)答。本研究構(gòu)建的重組質(zhì)粒和蛋白表達(dá)為后續(xù)高免血清的制備、ELISA檢測試劑盒的開發(fā)和基因工程疫苗的研發(fā)提供物質(zhì)基礎(chǔ)和理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:Guangdong Province is a large province of waterfowl breeding, but goose plague still occurs from time to time and causes great economic losses.There is still a lack of effective therapeutic drugs and related biological products for Gosling plague.The prevention and control of Gosling plague is mainly through the immunization of goose or muscovy duck before laying eggs, so that the goose or young Muscovy duck can obtain maternal antibody.So the serological investigation of goose and muscovy duck can be helpful to understand the immune level of Gosling plague in Guangdong province.In this experiment, 529 blood samples were collected from breeding geese, goslings, muscovy ducks and young muscovy ducks in the main goose farms in Guangdong Province, and some samples were detected by ELISA method.The results showed that the positive rate of goose plague antibody in 135 samples was 25.52%.The positive rate of antibody was 27.94 in northern Guangdong, 27.11 in western Guangdong, 17.74in eastern Guangdong and 25.75g in Pearl River Delta.Further analysis showed that 70 samples were positive in 370 goose sera collected in Guangdong Province, 18.92 in goose flock and 65 in 159 Muscovy duck serums.The antibody level of Gosling plague in Muscovy Duck was 40.88.A total of 95 samples were positive in 311 goose (Muscovy duck) serums, the positive rate of goose plague antibody in breeding goose (Muscovy duck) was 41.21, and 40 samples were positive in 218 goose (muscovy duck) serum.The positive rate of antibody in Gosling (Muscovy Duck) was 29.63.It is very important to develop and control the related biological products of Gosling plague virus in view of the intermingled phenomena of Gosling plague biological products in the market at present.In this study, the specific antigen part of VP3, the main component of the antigen determinant of goose plague virus particles, was amplified and ligated to NoV P-particle vector. The recombinant plasmid was constructed and named P-Particle-VP3.The recombinant plasmid was transformed into the BL21 receptive state and induced to express. It was found that the expression effect was the best when the IPTG concentration was 1m m / mL, and the protein expression reached the peak when the IPTG concentration was 1mM/mL for 5 h.Related studies have shown that Nov P-particle can be used as a new antigen presentation platform, which can improve the efficiency of antigen presentation, enhance the antigenicity and immunogenicity of antigen, and enhance the immune response of organism.The expression of recombinant plasmids and proteins provided material and theoretical basis for the development of Elisa kit and the development of genetic engineering vaccine.
【學(xué)位授予單位】：仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1749389