禽致病性大腸桿菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)2 EivC點(diǎn)突變的構(gòu)建及其ATPase活性分析
發(fā)布時間:2018-04-11 03:15
本文選題:禽致病性大腸桿菌 + Ⅲ型分泌系統(tǒng) ; 參考:《中國動物傳染病學(xué)報》2017年03期
【摘要】:為了分析禽致病性大腸桿菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)Ⅲ型分泌系統(tǒng)2(E.coli TypeⅢsecretion system2,ETT2)Eiv C ATPase關(guān)鍵活性位點(diǎn),本研究通過比對分析病原菌ATPase序列,篩選APEC ETT2 Eiv C的關(guān)鍵位點(diǎn)。然后設(shè)計點(diǎn)突變引物,通過PCR方法構(gòu)建Eiv C點(diǎn)突變片段,構(gòu)建Eiv C點(diǎn)突變重組表達(dá)質(zhì)粒。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后純化相應(yīng)蛋白,并檢測其ATPase活性。結(jié)果顯示,Eiv C蛋白包含F(xiàn)0F1 ATPase的保守序列,且具有ATPase活性。測序結(jié)果顯示Eiv C第175、199、201、233位氨基酸突變成功,融合蛋白獲得成功表達(dá)與純化。然而,點(diǎn)突變與野生型Eiv C的ATPase活性差異不具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。本研究結(jié)果表明第175、199、201、233位氨基酸不影響Eiv C的ATPase活性。
[Abstract]:In order to analyze the key active sites of 2(E.coli Type 鈪,
本文編號:1734175
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