本文選題：雞毒支原體 + 脂質(zhì)相關膜蛋白(LAMPs)　； 參考：《東北農(nóng)業(yè)大學》2017年碩士論文

【摘要】：雞毒支原體(Mycoplasma gallisepticum,M.gallisepticum)屬于支原體屬,能夠引起雞慢性呼吸道病(Chronic respiratory disease,CRD)、氣囊炎和氣管炎。雞毒支原體能夠黏附到宿主表面,激活宿主體內(nèi)相關信號通路,造成宿主細胞損傷或凋亡。雞毒支原體無細胞膜,但其表面存在著大量脂質(zhì)相關膜蛋白(lipid-associated membrane proteins,LAMPs)。許多研究表明,LAMPs可以黏附到宿主細胞表面,激活宿主的天然免疫應答,但是LAMPs如何激活宿主天然免疫應答的具體機制尚未報道。病原微生物入侵到動物體內(nèi)時,動物體首先啟動天然免疫反應,產(chǎn)生天然免疫應答,進而釋放相關炎癥因子起到抗感染的作用。在天然免疫應答的研究中,NF-κB信號通路研究的最為廣泛,存在于動物細胞表面的Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)在此過程中起到識別作用。TLRs家族成員眾多,各自能夠特異性識別配體,如TLR2和TLR4可以識別革蘭氏陽性菌表面的脂蛋白,激活下游信號分子,啟動數(shù)種信號通路并釋放相應的細胞因子,造成宿主細胞的損傷或凋亡。由于支原體LAMPs在結(jié)構上與革蘭氏陽性菌表面的脂蛋白相似,所以本實驗旨在研究感染雞毒支原體后是否能夠激活NF-κB信號通路并引起IL-1β的釋放,并且驗證TLR2和My D88在此過程中的作用。雞毒支原體LAMPs為混合物,其中含有的許多膜蛋白具有較高免疫原性,但其中何種蛋白能夠激活雞的天然免疫應答目前尚未明確。在大腸桿菌的相關研究中證實,Gro EL有較好的免疫原性。因此,研究雞毒支原體Gro EL是否具有同樣的高免疫活性,是否可以激活雞的天然免疫應答對雞毒支原體致病機制的研究具有重要意義。為研究雞毒支原體LAMPs和Gro EL誘導DF-1細胞IL-1β釋放的機制,本研究以雞成纖維細胞(DF-1)為細胞模型,首先利用SYBR Green I Real-time PCR和ELISA方法檢測LAMPs及Gro EL蛋白刺激后的DF-1細胞中IL-1β的釋放量。結(jié)果表明:雞毒支原體的LAMPs及Gro EL均能有效誘導DF-1細胞釋放IL-1β,且IL-1β的釋放量呈時間和劑量梯度。為了檢測NF-κB信號通路是否被激活,本研究采用激光共聚焦檢測p65入核和Western blot技術檢測p65磷酸化水平。結(jié)果顯示:雞毒支原體LAMPs能夠有效誘導DF-1細胞p65進核,并且雞毒支原體LAMPs和Gro EL均能使p65磷酸化水平提高,從而確定雞毒支原體LAMPs和Gro EL均能夠激活NF-κB信號通路。為明確My D88和TLR2在此過程中的作用,采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,抗體封閉方法使My D88和TLR2過表達或沉默,檢測兩種情況下IL-1β表達情況。經(jīng)檢測顯示:過表達My D88、TLR2組的IL-1βmRNA和蛋白水平顯著升高,而抗體封閉TLR2組和My D88沉默組的IL-1βmRNA和蛋白水平下降。證實LAMPs能夠與DF-1細胞膜上的TLR2受體結(jié)合,并激活下游接頭分子My D88,從而有效誘導DF-1細胞表達并分泌IL-1β。Gro EL蛋白在大腸桿菌中具有較高的免疫原性,為了證明其在雞毒支原體激活宿主天然免疫應答中的作用,本研究采用激光共聚焦檢測其黏附作用。結(jié)果表明:Gro EL蛋白可以成功的黏附到DF-1細胞表面,這為Gro EL蛋白發(fā)揮作用提供了基礎。為了確定雞毒支原體Gro EL激活宿主天然免疫的機制,本研究采用蛋白互作技術手段,即GST pulldown和免疫共沉淀,明確其在DF-1細胞中的互作蛋白。結(jié)果顯示:Gro EL蛋白能夠與DF-1細胞中的Annexin A2蛋白相互作用,為后期Gro EL致病機制的研究提供了重要的實驗依據(jù),也為雞毒支原體的致病機制提供了理論基礎。
[Abstract]:Mycoplasma gallisepticum ( M . gallisepticum ) belongs to the genus Mycoplasma and can cause chronic respiratory disease ( CRD ) , balloon inflammation and tracheitis . Mycoplasma gallisepticum can adhere to the host surface , activate relevant signal pathways in the host , and cause injury or apoptosis of host cells . There is a large number of lipid - associated membrane proteins ( LAMPs ) on the surface of Mycoplasma gallisepticum . In order to study whether mycoplasmal LAMPs can activate NF - 魏B signaling pathway and induce IL - 1尾 release , it is important to study whether mycoplasmal - like receptors ( TLR2 and Gro EL ) can activate NF - 魏B signaling pathway and release corresponding cytokines . The results showed that Gro EL protein could be successfully adhered to the surface of DF - 1 cells .

【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S852.62

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 朱翠明;汪世平;游曉星;曾焱華;陳曦;;肺炎支原體脂質(zhì)相關膜蛋白在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用機制[J];中國動脈硬化雜志;2012年09期

2 凌理軍;李素;董泓;賀番;馮爍;廖亞金;申梁;孫元;翁長江;仇華吉;;豬瘟病毒E2蛋白與豬RACK1相互作用的鑒定[J];中國預防獸醫(yī)學報;2012年04期

3 孟冬霞;賀東昌;武果桃;韓一超;任杰;薛俊龍;衛(wèi)學宏;;山西省雞毒支原體感染血清學調(diào)查[J];中國獸醫(yī)雜志;2011年08期

4 賈志江;劉娣琴;楊紅梅;;雞毒支原體感染的流行病學分析及綜合防制[J];畜牧獸醫(yī)雜志;2010年03期

5 李媛;董惠;張美晶;陳超;曹培麗;郭丹;姜海芳;辛九慶;;牛支原體套式PCR檢測方法的建立[J];中國預防獸醫(yī)學報;2009年09期

6 何軍;吳移謀;;支原體脂質(zhì)相關膜蛋白的研究進展[J];中國人獸共患病學報;2008年11期

7 辛九慶;李媛;郭丹;宋念華;胡守萍;陳超;裴潔;曹培麗;;國內(nèi)首次從患肺炎的犢牛肺臟中分離到牛支原體[J];中國預防獸醫(yī)學報;2008年09期

8 吳移謀;曾焱華;鄧仲良;詹利生;李忠玉;陳超群;;穿透支原體脂質(zhì)相關膜蛋白誘導人單核細胞產(chǎn)生炎癥性細胞因子[J];中華傳染病雜志;2006年04期

9 徐紅梅;曹雪濤;;免疫細胞TLRs信號轉(zhuǎn)導機制研究進展[J];中國免疫學雜志;2006年03期

10 張經(jīng)余,趙志虎,蔡民華;GroEL分子伴侶研究進展[J];生物技術通訊;2001年02期

相關碩士學位論文 前2條

1 田偉;TLR2和TLR6在雞毒支原體感染的作用機理研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2013年

2 楚黎莉;雞毒支原體西藏分離株的分離鑒定[D];西藏大學;2010年

，

本文編號：1733014