本文選題：副豬嗜血桿菌　切入點(diǎn)：血清分型　出處：《揚(yáng)州大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：副豬嗜血桿菌常存在于健康豬的上呼吸道,屬于巴斯德菌科嗜血桿菌屬,在臨床上主要引起豬的多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎。近年來國內(nèi)養(yǎng)豬場副豬嗜血桿菌病的日益嚴(yán)峻,對(duì)各養(yǎng)殖場造成嚴(yán)重的損失。本研究主要對(duì)江蘇省和安徽省養(yǎng)豬場的病死豬和健康豬進(jìn)行副豬嗜血桿菌的分離鑒定,為副豬嗜血桿菌的防治提供依據(jù)。同時(shí),本室初步研制副豬嗜血桿菌血清4型、5型和12型三價(jià)滅活疫苗,用BALB/c小鼠對(duì)其進(jìn)行免疫保護(hù)力的評(píng)價(jià)。1副豬嗜血桿菌的分離鑒定在揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院和揚(yáng)州某屠宰場進(jìn)行樣品采集,將其接種到巧克力培養(yǎng)基上培養(yǎng),通過PCR檢測副豬嗜血桿菌的16 SrRNA。對(duì)PCR檢測陽性的菌株進(jìn)行純化并保存。通過PCR鑒定之后,從病死豬中分離到8株副豬嗜血桿菌；從健康豬中分離到26株副豬嗜血桿菌,其分離率為7.12%。對(duì)其中的三株副豬嗜血桿菌進(jìn)行基因測序,其測序結(jié)果與國內(nèi)外分離株16 SrRNA基因序列同源性均能達(dá)到99%以上。對(duì)所有分離株用玻板凝集進(jìn)行血清分型。在病死豬的分離株中血清5型3株、血清12型2株、血清14型1株及不可定型2株。在健康豬的分離株中血清4型4株(15.38%)、5型1株(3.85%)、11型3株(11.54%)、12型10株(38.46%)、13型1株(3.85%)及未定型菌株7株(26.92%)。2副豬嗜血桿菌三價(jià)滅活疫苗的初步研制用副豬嗜血桿菌血清4型、5型和12型分離株分別對(duì)豚鼠進(jìn)行腹腔攻毒。結(jié)果血清5型和12型菌株攻毒豚鼠全部死亡；血清4型菌株攻毒豚鼠死亡1只(攻毒2只)。對(duì)死亡豚鼠進(jìn)行剖檢發(fā)現(xiàn)腹腔積液和胸腔積液及少量纖維素滲出,與副豬嗜血桿菌在病豬的癥狀相似。用三個(gè)不同劑量的副豬嗜血桿菌血清4型、5型和12型分離株分別對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行腹腔攻毒。結(jié)果三個(gè)血清型的菌株攻毒劑量達(dá)到5.0×109CFU時(shí),BALB/c小鼠均死亡。而攻毒劑量為1.0×109CFU時(shí),血清4型和5型菌株攻毒小鼠均死亡1只(攻毒2只),而血清12型菌株攻毒小鼠未死亡。用三價(jià)滅活疫苗1(含3個(gè)血清型菌株各1.0×109CFU)、三價(jià)滅活疫苗2(含3個(gè)血清型菌株各2.0×109 CFU)、三價(jià)滅活疫苗3(含3個(gè)血清型菌株各4.0×109CFU)及商品滅活疫苗分別對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行皮下免疫2次,二次免疫后14天,對(duì)各小鼠進(jìn)行腹腔攻毒。結(jié)果三價(jià)滅活苗免疫組1和2與商品疫苗免疫組對(duì)4型和5型菌株的抵抗力相當(dāng),保護(hù)率為40%左右。但在對(duì)12型菌株的抵抗力上,三價(jià)滅活疫苗免疫組1和2的保護(hù)率達(dá)到60%,而商品疫苗的保護(hù)率只有20%。三價(jià)滅活疫苗免疫組3對(duì)4型和5型菌株的免疫保護(hù)率要比商品疫苗免疫組保護(hù)率高20%,保護(hù)率為60%。在對(duì)12型菌株的抵抗力上,三價(jià)滅活疫苗免疫組3的保護(hù)率要比商品疫苗免疫組的保護(hù)率高60%,達(dá)到80%。綜上所述,本研究初步研制的副豬嗜血桿菌三價(jià)滅活疫苗的免疫保護(hù)效果要優(yōu)于商品滅活疫苗的免疫保護(hù)效果,對(duì)副豬嗜血桿菌血清4型、5型及12型具有較好的免疫保護(hù)能力。
[Abstract]:Haemophilus parasuis is commonly found in the upper respiratory tract of healthy pigs and belongs to Haemophilus Pasteulidae. It mainly causes polyserositis and arthritis in pigs clinically.In recent years, Haemophilus paraswine disease in domestic pig farms is becoming more and more serious, causing serious losses to various farms.In this study, Haemophilus parasuis was isolated and identified from diseased and dead pigs and healthy pigs in Jiangsu and Anhui pig farms in order to provide the basis for the prevention and control of Haemophilus parasuis.At the same time, a trivalent inactivated vaccine of Haemophilus parasuis serotype 4, serotype 5 and type 12 was developed in our laboratory.Evaluation of immune protection of BALB/c mice. 1 isolation and identification of Haemophilus suis in Yangzhou University Animal Hospital and a slaughterhouse of Yangzhou were collected and cultured on chocolate medium.The 16s rRNA of Haemophilus parasuis was detected by PCR.PCR positive strains were purified and preserved.After PCR identification, 8 Haemophilus parasuis strains were isolated from dead pigs and 26 Haemophilus parasuis strains were isolated from healthy pigs, the isolation rate was 7.12%.Three strains of Haemophilus parasuis were sequenced. The results showed that the homology of 16 SrRNA gene sequence was over 99%.All isolates were classified by glassy plate agglutination.Three strains of serotype 5, two strains of serotype 12, one strain of serotype 14 and two strains of untyped serotype were isolated from dead pigs.Preliminary development of a trivalent inactivated vaccine against Haemophilus parasuis serotype 4, serotype 4, serotype 15. 38, serotype 5 and serotype 3. 85, serotype 11, type 11, serotype 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, type 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11, strain 11Type 12 and type 12 isolates were used to attack guinea pigs intraperitoneally, respectively.Results all guinea pigs of serotype 5 and 12 died, and 1 guinea pig of serotype 4 died.The peritoneal effusion, pleural effusion and a small amount of cellulose exudation were found in the dead guinea pigs, which were similar to the symptoms of Haemophilus parahaemophilus in the diseased pigs.Three different doses of Haemophilus parahaemophilus serotype 4 serotype 5 and 12 strains were used to attack BALB/c mice intraperitoneally.Results when the amount of the three serotypes was 5.0 脳 109CFU, all the BALB / c mice died.At the dose of 1.0 脳 109CFU, one strain of serotype 4 and one strain of serotype 5 died (2 of them), while the strain of serotype 12 did not.BALB/c mice were immunized subcutaneously with trivalent inactivated vaccine 1 (containing 3 serotype strains 1.0 脳 10 9 CFUU each), trivalent inactivated vaccine 2 (containing 3 serotypes of 2. 0 脳 10 9 CFU), trivalent inactivated vaccine 3 (containing 4 0 脳 10 9 CFU each of 3 serotypes) and commercial inactivated vaccine.After the second immunization for 14 days, the mice were given intraperitoneal attack.Results the resistance of trivalent inactivated vaccine groups 1 and 2 to 4 and 5 strains was similar to that of commercial vaccine groups, and the protective rate was about 40%.However, the protective rates of trivalent inactivated vaccine groups 1 and 2 reached 60%, while that of commercial vaccines was only 20%.The protective rate of trivalent inactivated vaccine against 4 and 5 strains was 20% higher than that of commercial vaccine group, and the protective rate was 60%.The protective rate of trivalent inactivated vaccine group 3 was 60% higher than that of commercial vaccine group on resistance to strain 12.To sum up, the immune protective effect of the trivalent inactivated vaccine of Haemophilus parais was better than that of the commercial inactivated vaccine, and it had a better immune protection ability to Haemophilus parais serotype 4, serotype 5 and serotype 12.
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.28

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本文編號(hào)：1729957