本文選題：瞬時感受器電位　切入點：下丘腦　出處：《山東農(nóng)業(yè)大學》2017年碩士論文

【摘要】：在哺乳動物上,瞬時感受器電位(TRP)離子通道蛋白響應環(huán)境溫度變化,介導溫度感覺形成。因脊椎動物進化緣故,家禽TRP蛋白的種類和結構與哺乳動物明顯不同。本研究通過測定雞溫敏TRP蛋白的組織分布和種間差異,探析下丘腦TRP蛋白表達與肉雞體溫發(fā)育的相關性,闡釋TRP蛋白在熱應激、免疫應激條件下對雞胚腸上皮細胞炎癥反應的調(diào)控作用,進一步明確雞溫敏TRP蛋白在中樞和外周組織的生理功能,為家禽體熱及免疫調(diào)節(jié)提供新靶點、新思路。試驗一研究雞溫敏TRP蛋白的組織分布和品種表達差異。以體型有差異的農(nóng)大3號蛋雞和海蘭褐蛋雞為研究對象,分別采取下丘腦、海馬、肝臟、心臟、肺臟、腎臟、小腸、輸卵管、卵巢組織。通過熒光定量PCR方法檢測6種溫敏TRP離子通道在各個組織的表達量,并通過免疫組化進行組織定位和定量。結果顯示,在蛋雞體內(nèi)主要表達的溫敏TRP離子通道蛋白有:TRPV1、TRPV2、TRPV3、TRPA1、TRPM8五種,TRPV4通道的表達量極低,幾乎沒有。總體來看,TRP通道在下丘腦和海馬的表達量較高且集中分布于神經(jīng)元,6種通道中的TRPV3表達量相對較高。在一些組織中,TRPV1、TRPV2、TRPA1和TRPM8的表達都存在品種間的差異。試驗二研究肉雞下丘腦TRP蛋白表達的發(fā)育規(guī)律及與體溫的關聯(lián)。選取1日齡肉雞,常規(guī)飼養(yǎng),每周挑選體溫差異大的個體,分為高體溫和低體溫兩組,每組8只。屠宰,取下丘腦組織,檢測TRPV2和TRPV3離子通道的蛋白表達量。結果顯示,肉雞的體溫隨生長發(fā)育逐漸升高,個體體溫差異逐漸縮小。TRPV3離子通道在不同日齡的表達存在顯著差異。在肉雞發(fā)育早期和末期,TRPV2和TRPV3通道蛋白的表達與體溫高低呈現(xiàn)出了一致性,即體溫高的表達量高,反之亦然。試驗三研究TRP蛋白在熱應激、免疫應激介導雞胚腸上皮細胞炎癥反應中的作用。試驗分兩部分:(1)一方面培養(yǎng)雞胚腸上皮細胞,隨機分為3組(每組6個重復),分別置于34、40和43oC孵育1 h,提取總蛋白。另一方面,培養(yǎng)雞胚腸上皮細胞,隨機分為3組(每組6個重復),分別為對照組(37oC培養(yǎng))、高溫組(43oC培養(yǎng))和高溫+TRP抑制劑組(43oC培養(yǎng)+釕紅)。釕紅提前1小時加入,各溫度處理時間為1 h,提取細胞總RNA,檢測促炎因子TNF-α、IL-1和抑炎因子IL-10的表達量。結果顯示,促炎因子在高溫組的表達量高于另外兩組,抑炎因子在高溫組的表達量低于另外兩組。TNF-α和IL-1在高溫組的表達量顯著高于高溫+TRP抑制劑組(P0.05)。(2)培養(yǎng)雞胚腸上皮細胞,隨機分為4組,分別為對照組(加生理鹽水)、脂多糖組(LPS,0.5μg/m L,2 h)、TRP離子通道蛋白抑制劑組(釕紅,10μmol/L,3 h)和LPS+TRP抑制劑組(先加入釕紅孵育1 h后,再加入LPS孵育2 h),每組6個重復。細胞經(jīng)上述處理后,提取總RNA,測定TRP離子通道蛋白和炎性因子的基因表達。結果表明,LPS處理后,TRPV1與TRPV3的表達量顯著低于對照組,IL-1和IL-10的表達顯著高于對照組。LPS+TRP抑制劑組的IL-1表達顯著低于LPS處理組。以上結果表明,雞溫敏TRP離子通道蛋白的分布具有組織和品種特異性,下丘腦TRPV2和TRPV3表達參與家禽體溫的中樞調(diào)控,腸道TRPV1和TRPV3表達與熱應激和免疫應激介導的炎癥反應相關。
[Abstract]:The expression of TRPV3 and TRPV3 in the hypothalamus , hippocampus , liver , heart , lung , kidney , intestine , fallopian tube and ovary were studied . The expression of IL - 1 and IL - 10 in chicken embryo intestinal epithelial cells was significantly lower than that in the control group ( P 0.05 ) . The results showed that the expression of TNF - 偽 and TRPV3 was significantly lower than that in the control group ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S831

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本文編號：1719055