本文選題：犬乳腺腫瘤　切入點：阿司匹林　出處：《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：惡性腫瘤嚴(yán)重危害人類的健康,并已成為現(xiàn)階段重大的公共醫(yī)療問題。探尋有效的治療惡性腫瘤的方法早已成為世界各國醫(yī)學(xué)研究的重點。近年來隨著我國社會的發(fā)展,人們的生活方式和所處生態(tài)環(huán)境的改變導(dǎo)致了惡性腫瘤的發(fā)病形勢極為嚴(yán)峻,造成社會負(fù)擔(dān)日益加劇,其中乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤性疾病。近年來的流行病學(xué)調(diào)查顯示,乳腺癌的發(fā)病率和致死率均有逐年上升的趨勢。阿司匹林作為經(jīng)典的非甾類抗炎藥,具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗風(fēng)濕、防治心腦血管疾病等功效,被廣泛應(yīng)用于臨床各領(lǐng)域。近年來隨著對阿司匹林藥理作用研究的深入,越來越多的證據(jù)表明其具有抗腫瘤效應(yīng)。服用阿司匹林可降低癌癥的發(fā)生風(fēng)險,并有效的延長癌癥患者的生存期和降低其癌癥的復(fù)發(fā)。目前,大量的實驗結(jié)果顯示阿司匹林可以在體內(nèi)外抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖活性。隨后人們對阿司匹林發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)的具體分子機(jī)制開展了大量的科學(xué)探索,然而從現(xiàn)有報道來看,阿司匹林的抗腫瘤作用機(jī)制還未得到完全揭示,這是因為其藥理作用較為復(fù)雜,并可在不同的腫瘤細(xì)胞中表現(xiàn)出不同的作用途徑,同時缺乏系統(tǒng)和完善的在體實驗,這也限制了阿司匹林在腫瘤臨床中的應(yīng)用。相比較結(jié)腸癌等消化道惡性腫瘤來說,阿司匹林對于乳腺腫瘤作用效果的報道相對較少,對于其抗癌機(jī)制的研究也缺乏系統(tǒng)的闡述,且在一些問題上還存在明顯的爭議。犬乳腺腫瘤為獸醫(yī)臨床上常見的腫瘤性疾病,對犬的健康造成嚴(yán)重危害,目前臨床上主要采取手術(shù)切除的方法來對其進(jìn)行治療。與人類乳腺腫瘤相同,對于惡性并伴有轉(zhuǎn)移的犬乳腺腫瘤來說,單純的手術(shù)治療效果并不理想,手術(shù)配合系統(tǒng)的輔助治療方案對于犬乳腺腫瘤顯得尤為必要。由于犬和人類的生活環(huán)境息息相關(guān),其一直作為醫(yī)學(xué)研究中理想的實驗動物模型。此外,犬乳腺腫瘤和人乳腺腫瘤無論是在發(fā)病病因和病程發(fā)生發(fā)展等方面,都具有高度相似性。開展犬乳腺腫瘤的研究不僅能為獸醫(yī)臨床探尋犬乳腺腫瘤有效的治療方案,更可以為人醫(yī)臨床提供重要的數(shù)據(jù)參考�；诎⑺酒チ值那捌谘芯炕A(chǔ)和犬作為乳腺腫瘤研究模型的重要意義,且目前并未見有阿司匹林對犬乳腺腫瘤的研究報道,本課題開展阿司匹林對犬乳腺腫瘤細(xì)胞的抑制作用及其分子機(jī)制的研究,進(jìn)一步揭示阿司匹林的抗腫瘤作用機(jī)制,為下一步在犬乳腺腫瘤模型中評價阿司匹林的抗腫瘤作用提供理論依據(jù),并為阿司匹林能早日應(yīng)用于乳腺腫瘤的臨床治療奠定一定的基礎(chǔ)。本實驗通過CCK-8和克隆形成實驗的方法,檢測不同濃度阿司匹林對犬乳腺腫瘤細(xì)胞增殖活性的影響,并建立了裸鼠犬乳腺腫瘤移植瘤模型,進(jìn)一步觀察阿司匹林在體內(nèi)的抗腫瘤效果。采用Annexin V-FITC染色法,檢測阿司匹林對犬乳腺腫瘤細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用,同時通過western blot實驗檢測阿司匹林對犬乳腺腫瘤細(xì)胞中PARP、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)水平的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測了阿司匹林對犬乳腺腫瘤細(xì)胞周期分布的影響,通過western blot實驗檢測了Cyclin D1、CDK4、E2F1和p21蛋白的表達(dá)變化,以揭示阿司匹林阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程的機(jī)制。Western blot實驗檢測阿司匹林處理犬乳腺腫瘤細(xì)胞后,PI3K/Akt和Wnt/β-catenin信號通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)水平變化,并提取核內(nèi)蛋白,進(jìn)一步檢測阿司匹林對犬乳腺腫瘤細(xì)胞核內(nèi)β-catenin蛋白水平的影響,同時通過應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光和免疫組織化學(xué)染色實驗,檢測阿司匹林對犬乳腺腫瘤細(xì)胞內(nèi)p-GSK3β和β-catenin蛋白定位及表達(dá)水平的影響,探究阿司匹林抑制犬乳腺腫瘤細(xì)胞增殖的分子調(diào)節(jié)機(jī)制。采用Transwell小室實驗檢測阿司匹林對犬乳腺腫瘤細(xì)胞遷移力及侵襲力的影響,并結(jié)合western blot實驗檢測了阿司匹林處理后的犬乳腺腫瘤中VEGF和E-cadherin蛋白表達(dá)水平的變化,以闡述阿司匹林對犬乳腺腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響。評估阿司匹林與順鉑或他莫昔芬的聯(lián)合應(yīng)用效果,以奠定阿司匹林與其聯(lián)合應(yīng)用的理論基礎(chǔ)。實驗結(jié)果表明:(1)阿司匹林在體外可以抑制犬乳腺腫瘤細(xì)胞系CHMp和CHMm的增殖活性,并抑制犬乳腺腫瘤細(xì)胞系CHMp和CHMm的克隆形成,且呈劑量和時間依賴性;體內(nèi)實驗結(jié)果證明,阿司匹林抑制了裸鼠犬乳腺腫瘤移植瘤的生長,表明阿司匹林在體外與體內(nèi)對犬乳腺腫瘤細(xì)胞均具有增殖抑制效應(yīng)。(2)通過細(xì)胞凋亡檢測實驗證明,阿司匹林對犬乳腺腫瘤細(xì)胞CHMp沒有凋亡誘導(dǎo)作用,且不影響CHMp細(xì)胞內(nèi)PARP、Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá);在10m M阿司匹林作用下,犬乳腺腫瘤細(xì)胞CHMm可發(fā)生晚期凋亡和壞死,細(xì)胞內(nèi)PARP蛋白被切割,且Bcl-2/Bax的比值發(fā)生顯著性下降,表明高濃度阿司匹林具有誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移型犬乳腺腫瘤細(xì)胞CHMm發(fā)生晚期凋亡和壞死的作用。阿司匹林誘導(dǎo)犬乳腺腫瘤細(xì)胞阻滯在G0/G1期,并下調(diào)了Cyclin D1、CDK4、E2F1蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平,上調(diào)了p21蛋白的表達(dá)水平,表明阿司匹林可通過誘導(dǎo)犬乳腺腫瘤細(xì)胞周期阻滯發(fā)揮抗腫瘤效果,(3)通過檢測PI3K/Akt信號通路中相關(guān)蛋白實驗,阿司匹林通過下調(diào)犬乳腺腫瘤細(xì)胞中PI3K、p-Akt蛋白的表達(dá)水平,抑制PI3K/Akt信號通路。(4)阿司匹林抑制Wnt/β-catenin信號通路,主要是下調(diào)p-GSK3β、β-catenin蛋白的表達(dá)水平,同時抑制β-catenin蛋白的核內(nèi)表達(dá)水平,抑制其下游的調(diào)節(jié)分子c-myc、PPAR-δ的表達(dá)。阿司匹林降低VEGF和增加E-cadherin蛋白在犬乳腺腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平,阻止犬乳腺腫瘤細(xì)胞的遷移及侵襲,進(jìn)而抑制其轉(zhuǎn)移能力。(5)阿司匹林分別與順鉑、他莫昔芬表現(xiàn)出藥效相加的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.292

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫思超;孫東東;王英雪;常宏建;劉云;;順鉑誘導(dǎo)體外犬乳腺腫瘤細(xì)胞凋亡影響[J];中國獸醫(yī)雜志;2016年09期

2 顧慶云;金紅巖;封家旺;;犬乳腺腫瘤的臨床分析[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2016年09期

3 朱國;師福山;;犬乳腺腫瘤的病理組織學(xué)觀察與COX-2表達(dá)的分析[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2016年01期

4 黃信;張清;呂榮釗;何偉麗;唐芬;洪嘉凡;王寧霞;;乳腺癌組織中蛋白Bcl-2的表達(dá)及意義[J];暨南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2015年05期

5 沈曉宇;馬銳;;EphA2、E-cadherin表達(dá)與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析[J];航空航天醫(yī)學(xué)雜志;2015年10期

6 李明;譚詩云;;阿司匹林對大腸癌LoVo細(xì)胞增殖、凋亡的影響及機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2014年06期

7 阿迪娜·賈庫林;迪麗米娜·伊拉木;郭麗英;;Cyclin D1在不同分子亞型乳腺癌中的表達(dá)及其對預(yù)后的影響[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2014年02期

8 張紅梅;包海榮;韓聃;;犬乳腺腫瘤的診治[J];吉林畜牧獸醫(yī);2013年05期

9 張曉月;張維東;王兆朋;王朝霞;張月英;賈青;;阿司匹林對小鼠S180肉瘤生長及血管和淋巴管生成的影響[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年01期

10 王國忠;邵華;周麗;崔紅霞;楊宏艷;;阿司匹林通過核因子-κB上調(diào)炎癥因子的表達(dá)抑制潰瘍愈合[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報;2011年23期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 陳榮輝;阿司匹林聯(lián)合雷公藤內(nèi)酯醇誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

2 丁江華;阿司匹林對多發(fā)性骨髓瘤的抗腫瘤效應(yīng)及其增強(qiáng)硼替佐米細(xì)胞毒作用的分子機(jī)制研究[D];南昌大學(xué);2014年

3 李婷婷;HOXB7激活WnT/β-Catenin信號通路促進(jìn)結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

4 郭丹;前列腺素E_2活化Wnt/β-catenin通路促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長的機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 應(yīng)俊;阿司匹林對結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的預(yù)防作用及其機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2014年

2 高杰;乳腺癌轉(zhuǎn)移生物標(biāo)志物及中藥干預(yù)作用的初步研究[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2012年

3 劉小華;DR5在阿司匹林誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制[D];河南大學(xué);2010年

4 王蓓;阿司匹林抑制宮頸癌Hela細(xì)胞增殖及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

，

本文編號：1718482