本文選題：雞　切入點(diǎn)：柔嫩艾美耳球蟲　出處：《安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：雞球蟲病(Coccidiosis)是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的一種腸道寄生蟲病,其中致病性最強(qiáng)、危害最大的是柔嫩艾美耳球蟲(E.tenella)。為了檢測安徽省廬江縣、青陽縣和肥西縣三個(gè)地區(qū)E.tenella的耐藥性情況,分別采集廬江縣、青陽縣和肥西縣三個(gè)地區(qū)的養(yǎng)雞場球蟲病患病雞的盲腸內(nèi)容物并培養(yǎng),通過分離單卵囊進(jìn)行分離純化,根據(jù)卵囊的生物學(xué)特性和分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行純種E.tenella卵囊的鑒定,為耐藥性的檢測奠定基礎(chǔ)。本研究根據(jù)對廬江縣、青陽縣和肥西縣三個(gè)地區(qū)進(jìn)行調(diào)查,最終選定三個(gè)地區(qū)均經(jīng)常使用的五種抗球蟲藥物作為檢測藥物,即磺胺氯吡嗪鈉(Sulfachloropyrazine sodium)、地克珠利(Diclazuril)、妥曲珠利(Toltrazuril)、氨丙啉(Amprolium)以及氯羥吡啶(Clopidol)。分別采用抗球蟲指數(shù)(ACI)、相對盲腸卵囊產(chǎn)量(ROP)、病變記分減少率(RLS)和最適抗球蟲活性百分率(POAA)四項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行綜合耐藥性判定;通過同工酶電泳分別獲得上海標(biāo)準(zhǔn)株、南京標(biāo)準(zhǔn)株、各藥物的耐藥蟲株和三個(gè)地理株的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)乳酸脫氫酶(LDH)、以及葡萄糖磷酸異構(gòu)酶(GPI)的同工酶譜,通過比較酶譜間的差異進(jìn)行耐藥性分析;利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)的方法擴(kuò)增上海標(biāo)準(zhǔn)株、南京標(biāo)準(zhǔn)株和三個(gè)地理株的基因,根據(jù)DNA條帶的相似性與差異性觀察耐藥性的產(chǎn)生情況以及遺傳變異情況。根據(jù)耐藥性的檢測結(jié)果,結(jié)合莫能霉素(Monensin)、尼卡巴嗪(Nicarbazin)和球蟲酯(乙氧酰胺苯甲酯)(Ethopabate)的作用機(jī)制與作用峰期的特點(diǎn),采用莫能霉素+尼卡巴嗪+球蟲酯配合用藥,以抗球蟲指數(shù)、相對盲腸卵囊產(chǎn)量、病變記分減少率和最適抗球蟲活性百分率四項(xiàng)指標(biāo)綜合判定療效,篩選最佳的藥物濃度。結(jié)果顯示:利用瓊脂小塊分離球蟲單卵囊的技術(shù)簡單可靠,成功率高,分離后的卵囊經(jīng)分子生物學(xué)技術(shù)和生物學(xué)特性鑒定均為純種E.tenella,分別命名為廬江株、青陽株和肥西株;雞體試驗(yàn)法檢測可知廬江株球蟲對妥曲珠利與氨丙啉敏感,對氯羥吡啶中度耐藥,對地克珠利與磺胺氯吡嗪鈉完全耐藥;青陽株球蟲對地克珠利與妥曲珠利敏感,對磺胺氯吡嗪鈉與氯羥吡啶完全耐藥,對氨丙啉中度耐藥;肥西株球蟲對磺胺氯吡嗪鈉敏感,對地克珠利、氯羥吡啶和氨丙啉完全耐藥,對妥曲珠利中度耐藥;E.tenella上海標(biāo)準(zhǔn)株與南京標(biāo)準(zhǔn)株的均只含有一條LDH-2酶帶,氨丙啉耐藥株有一條特征性的LDH-3酶帶,磺胺氯吡嗪鈉耐藥株與氯羥吡啶耐藥株有一條不同于標(biāo)準(zhǔn)株的LDH-2酶帶,地克珠利耐藥株和妥曲珠利耐藥株酶帶與標(biāo)準(zhǔn)株的酶譜一致,三個(gè)地理株與耐藥株有交叉條帶,與雞體試驗(yàn)檢測結(jié)果相符;磺胺氯吡嗪鈉耐藥株與標(biāo)準(zhǔn)株含有GPI-1與GPI-2酶帶,其余耐藥株均有不同于標(biāo)準(zhǔn)株的特征性GPI同工酶帶,廬江株與肥西株都與耐藥株有交叉的GPI同工酶帶,與雞體試驗(yàn)檢測結(jié)果一致,但是青陽株有一條不同于其他耐藥株的GPI-5酶帶,可能與青陽株球蟲耐受其他抗球蟲藥物有關(guān);G6PD同工酶檢測中,標(biāo)準(zhǔn)株、磺胺氯吡嗪鈉耐藥株以及地克珠利耐藥株均只含有G6PD-1一條酶帶,因此不能通過G6PD同工酶判斷球蟲是否對這兩種藥物耐藥,妥曲珠利耐藥株、氯羥吡啶耐藥株和氨丙啉耐藥株都不同于標(biāo)準(zhǔn)株的G6PD同工酶譜,三個(gè)地理株的G6PD同工酶譜與耐藥株有交叉,與雞體試驗(yàn)檢測結(jié)果一致,但青陽株有一條特有的G6PD-4酶帶;RAPD分析結(jié)果中,各蟲株之間的DNA條帶不盡相同,相似值位于48.00%~72.00%之間,上海標(biāo)準(zhǔn)株與南京標(biāo)準(zhǔn)株之間的相似值最高,為72.0%,三個(gè)地理株與兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)株之間的相似值處于較低水平,表明球蟲耐藥后發(fā)生了基因變異;莫能霉素110mg.kg-1+尼卡巴嗪125 mg.kg-1+球蟲酯8 mg.kg-1治療三個(gè)地區(qū)的E.tenella混合蟲株,ACI為181.21,屬于高效抗球蟲藥,能夠有效解決廬江縣、青陽縣和肥西縣三個(gè)地區(qū)的雞E.tenella的耐藥問題。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.31

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本文編號：1715462