發(fā)布時(shí)間：2018-04-03 00:21

  本文選題：J亞群禽白血病病毒　切入點(diǎn)：多表位疫苗　出處：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：禽白血病(Avian Leukosis,AL)是指由反轉(zhuǎn)錄病毒科甲型反轉(zhuǎn)錄病毒屬禽反轉(zhuǎn)錄病毒引起的以禽類(lèi)造血組織中某些細(xì)胞成分過(guò)度增生為主的各種具有傳染性的腫瘤性疾病,是世界性分布的禽腫瘤性傳染病,嚴(yán)重制約養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要疫病之一。自1911年發(fā)現(xiàn)以來(lái),ALV(Avian Leukosis Virus)成為研究腫瘤性傳染病發(fā)病機(jī)理的重要模型,針對(duì)它的研究一直受到各國(guó)科學(xué)家的重視。由于該病毒涵蓋多種亞群,同一亞群又有不同毒株,以及相關(guān)的內(nèi)源性病毒的廣泛存在,造成本病的防控難度大大增加。西方發(fā)達(dá)國(guó)家由于養(yǎng)殖模式和管理方式等方面的優(yōu)勢(shì),通過(guò)幾十年的努力,對(duì)規(guī)�；B(yǎng)殖場(chǎng)ALV的感染基本實(shí)現(xiàn)了凈化。但是,近年來(lái),ALV-J(J亞群禽白血病病毒)在我國(guó)的發(fā)生和蔓延卻呈現(xiàn)愈演愈烈的情形,不斷有我國(guó)白羽雞群和地方種雞發(fā)生ALV-J感染的報(bào)道,ALV-J感染的發(fā)病日齡也呈現(xiàn)提前的趨勢(shì),并且首次發(fā)現(xiàn)了急性致瘤性ALV-J引發(fā)急性纖維肉瘤的自然感染的病例。ALV-J對(duì)我國(guó)禽業(yè)發(fā)展已造成嚴(yán)重威脅,針對(duì)規(guī)模化雞場(chǎng)進(jìn)行ALV的凈化已成為我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)當(dāng)前的重要任務(wù),但是,由于我國(guó)地緣遼闊、雞群品系繁多、養(yǎng)殖條件參差不齊等原因,實(shí)現(xiàn)ALV全面的凈化任重道遠(yuǎn)。許多學(xué)者嘗試從分子生物學(xué)的角度研發(fā)ALV的疫苗降低ALV在雞群的感染率,以期加速ALV的凈化腳步。多表位疫苗(Multi-epitope Vaccine)是利用分子生物學(xué)和計(jì)算機(jī)科學(xué)分析、篩選、獲取目標(biāo)抗原中的優(yōu)秀抗原表位,將多個(gè)理想的抗原表位優(yōu)化并串聯(lián)研制出的一種新型疫苗。這種疫苗尤其適用于基因容易突變或者基因組中存在癌基因的病毒,如人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)、禽白血病病毒(ALV)。通過(guò)分析并獲得這些病毒的抗原性和保守性都比較強(qiáng)的抗原表位研制多表位疫苗是攻克這些腫瘤疾病的重要方向。釀酒酵母表面展示系統(tǒng)(Saccharomyces Cerevisiae Surface Display System)作為一種真核表達(dá)系統(tǒng),越來(lái)越受到關(guān)注,在抗原抗體篩選、蛋白定向進(jìn)化、水體凈化和活載體疫苗等方面得到廣泛的應(yīng)用。相比大腸桿菌、沙門(mén)氏菌等,釀酒酵母被公認(rèn)為是安全無(wú)毒(GRAS,Generally Recognized as Safe)的食品級(jí)工業(yè)菌,廣泛用于食品發(fā)酵、制藥工程和畜禽飼料等領(lǐng)域,酵母的真核表達(dá)系統(tǒng)的翻譯后修飾比細(xì)菌更具優(yōu)勢(shì)。本研究主要是利用酵母表面展示系統(tǒng)和多表位疫苗相關(guān)技術(shù),通過(guò)已發(fā)表的關(guān)于A(yíng)LV-J病毒結(jié)構(gòu)的研究結(jié)果和生物信息軟件等篩選出ALV-J中保守性和抗原性較好的表位基因Gag(278 376aa),Pol(784 855aa),Env(Gp85:145 156aa和Gp37:412 538aa)片段串聯(lián)為多表位基因X,使用EBY100/pCTCON2酵母表面展示系統(tǒng),構(gòu)建了ALV-J嵌合多表位基因釀酒酵母表面展示載體EBY100/pCTCON2-X,并對(duì)嵌合多表位基因X在酵母細(xì)胞表面的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明,本研究成功構(gòu)建了ALV-J嵌合多表位基因酵母表面展示載體,經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)表達(dá),在酵母細(xì)胞表面成功展示了ALV-嵌合多表位基因的蛋白。通過(guò)對(duì)誘導(dǎo)條件的優(yōu)化,我們發(fā)現(xiàn)EBY100/pCTCON2-X在誘導(dǎo)后第24h,ALV-J嵌合多表位基因表達(dá)程度最高,表達(dá)效率約為35%,最高達(dá)到50%。本研究構(gòu)建的ALV-J嵌合多表位基因酵母表面展示載體為后續(xù)針對(duì)ALV-J的釀酒酵母活載體疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Avian leukosis ( ALV - J ) is one of the most important infectious diseases in poultry industry . Generally Recognized as Safe)鐨勯鍝佺駭宸ヤ笟鑿，

本文編號(hào)：1702792