東北地區(qū)致?tīng)倥8篂a大腸桿菌的分離鑒定與HPI毒力島相關(guān)序列分析
本文選題:犢牛腹瀉 切入點(diǎn):大腸桿菌 出處:《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文
【摘要】:犢牛腹瀉性大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌所引起的一種初生犢牛的消化道疾病,該病的主要臨床癥狀是腹瀉。大腸桿菌的毒力因子種類(lèi)多,致病作用復(fù)雜,菌株的致病力主要是多種毒力因子綜合作用的結(jié)果。近年來(lái),犢牛大腸桿菌病的死亡率和發(fā)病率逐漸升高,致病性大腸桿菌作為人畜共患病的重要病原,對(duì)人類(lèi)公共衛(wèi)生健康造成了嚴(yán)重的危害。為了研究東北地區(qū)犢牛腹瀉病的病原,本試驗(yàn)于2013年8月-12月采用滅菌棉拭子無(wú)菌采集東北地區(qū)部分地區(qū)奶牛場(chǎng)發(fā)生疑似腹瀉癥狀犢牛直腸拭子樣品,共153份,進(jìn)行病原菌的分離,理化、16s rDNA鑒定、O因子血清型鑒定、致病性分析和HPI毒力島核心功能區(qū)的六種毒力基因irp2、irp3、irp5、irp8、asn_tRNA_intB、fyuA、ybtA基因攜帶情況進(jìn)行檢測(cè)。試驗(yàn)對(duì)分離株進(jìn)行培養(yǎng)特性、一系列生化鑒定、16SrRNA鑒定以及分子生物學(xué)鑒定,分離得到的細(xì)菌中大腸桿菌共74株,同時(shí)分離得到1株傷口埃希氏菌、3株肺炎克雷伯菌、7株腸桿菌科(未鑒定到種屬)和1株阪崎腸桿菌。本次試驗(yàn)鑒定出8種單一血清型,分別是O2、O9、O14、O15、O36、O78、O101、O137,2種混合血清型包括O14-O15、O14-O137。其中O14、O36、O14-O15、O14-O137為優(yōu)勢(shì)血清型。74株大腸桿菌均具有一定的致病力,其中28株大腸桿菌具有高度致病力。最后,對(duì)確定的大腸桿菌菌株進(jìn)行HPI毒力島的檢測(cè),irp2基因陽(yáng)性率74%(55/74),即55株大腸桿菌HPI陽(yáng)性;fyuA、irp3、irp5、irp8、asn_tRNA_intB和ybtA基因陽(yáng)性檢出率分別為32%(18/55)、23%(13/55)、12%(7/55)、27%(15/55)、10%(6/55)、23%(13/55)。綜上,本實(shí)驗(yàn)初步了解了東北地區(qū)牛源大腸桿菌的優(yōu)勢(shì)血清型以及HPI毒力島中毒力因子的分布情況,為臨床的合理用藥以及對(duì)大腸桿菌病的預(yù)治提供了有利的科學(xué)依據(jù)。
[Abstract]:Diarrhoeal Escherichia coli is a kind of digestive tract disease caused by pathogenic Escherichia coli in calves. The main clinical symptom of the disease is diarrhea. There are many kinds of virulence factors and complex pathogenicity of Escherichia coli. In recent years, the mortality and morbidity of Escherichia coli in calves have increased gradually, and pathogenic Escherichia coli is an important pathogen of zoonosis. In order to study the pathogen of calf diarrhea disease in Northeast China, A total of 153 samples of rectal swabs from calves with suspected diarrhea symptoms were collected from dairy farms in northeast China from August to December 2013. The pathogenic bacteria were isolated, and the serotype of factor O was identified by 16s rDNA. Pathogenicity analysis and the detection of six virulence genes irp2rp3rp3rp3rp3rp8asntRNAin intBfyuAybtA gene carried out in the core functional region of HPI virulence island. The culturing characteristics, a series of biochemical identification, 16s rRNA identification and molecular biological identification of the isolated strains were studied. A total of 74 strains of Escherichia coli were isolated, 3 strains of Klebsiella pneumoniae and 1 strain of Enterobacter sakazakii were isolated. The two mixed serotypes, O14-O15, O14-O36-O78-O101O137and O14O36-O14O15O14-O137, have some virulence, and 28 of them have high virulence. Finally, O14O36-O14O15O14-O137 is the dominant serotype of Escherichia coli, and 28 of them have high virulence. Finally, O14O36-O14O15O14-O137 is the predominant serotype of Escherichia coli, and 28 of them are highly virulent. The positive rate of the HPI virulence island of E. coli strains was 7455% 74%, that is 55 strains of Escherichia coli HPI positive Fyu Airp5irp5 irp8asntRNAintB and ybtA gene positive rates were 32 ~ 18 / 55 / 55 ~ 12755 ~ 25 ~ 12755 ~ 25 ~ 12755 ~ (5)% ~ (27) ~ 15 ~ 15 ~ 55 ~ 10 / 10 / 10 / 55 / 10 / 10 ~ 55 / 10 / 10 / 10 ~ 55 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10 / 10. This experiment preliminarily understood the predominant serotype of bovine Escherichia coli and the distribution of toxic factor of HPI virulence island in Northeast China, which provided a favorable scientific basis for the rational use of drugs in clinic and the pre-treatment of Escherichia coli disease.
【學(xué)位授予單位】:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類(lèi)號(hào)】:S852.61
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,本文編號(hào):1695698
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