本文選題：豬德爾塔冠狀病毒　切入點(diǎn)：核衣殼蛋白　出處：《微生物學(xué)通報(bào)》2017年12期

【摘要】：【目的】豬德爾塔冠狀病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種豬腸道冠狀病毒,2014年首次暴發(fā)于美國(guó),隨后亞洲多個(gè)國(guó)家也相繼報(bào)道,對(duì)養(yǎng)豬業(yè)構(gòu)成了巨大威脅。以大腸桿菌表達(dá)純化的PDCoV重組核衣殼(N)蛋白為包被抗原,建立檢測(cè)PDCoV抗體的間接ELISA方法,為PDCoV的血清抗體檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查提供工具�！痉椒ā恳訮DCoV CHN-HN-2014株的基因組RNA為模板,通過RT-PCR擴(kuò)增PDCoV核衣殼蛋白(N)基因的全長(zhǎng)cDNA,將其插入原核表達(dá)載體pET-30a中,構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒p ET30a-N,轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta(DE3),經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),以純化的重組N蛋白為包被抗原,建立PDCoV N-ELISA抗體檢測(cè)方法,評(píng)估其特異性、敏感性、穩(wěn)定性,并用于臨床血清的檢測(cè)。【結(jié)果】SDS-PAGE電泳檢測(cè)證實(shí)表達(dá)的重組N蛋白主要以可溶性形式存在,Western blotting證實(shí)表達(dá)的重組蛋白具有反應(yīng)活性。用純化的重組蛋白建立的N-ELISA具有良好的特異性、敏感性、穩(wěn)定性。與中和試驗(yàn)同時(shí)檢測(cè)148份免疫豬血清和102份臨床血清,兩種方法的陽(yáng)性符合率為88.99%,陰性符合率為92.90%,總符合率為91.20%。用建立的ELISA方法檢測(cè)267份臨床血清,PDCoV抗體陽(yáng)性血清的比率為66.67%�！窘Y(jié)論】建立的豬德爾塔冠狀病毒N-ELISA抗體檢測(cè)方法與中和試驗(yàn)的符合率高,可用于PDCoV血清抗體檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查。
[Abstract]:[objective] Porcine Delta coronavirus (PDCoV) is a newly discovered porcine intestinal coronavirus in recent years. It first broke out in the United States in 2014, and was subsequently reported in many countries in Asia. The recombinant PDCoV nucleocapsid protein expressed by Escherichia coli was used as the coating antigen to establish an indirect ELISA method for the detection of PDCoV antibody. [methods] using genomic RNA of PDCoV CHN-HN-2014 strain as template, the full-length cDNA of PDCoV nucleocapsid protein N) gene was amplified by RT-PCR and inserted into prokaryotic expression vector pET-30a. The prokaryotic expression plasmid pET30a-N was constructed and transformed into E. coli Rosetta-DE3N. The expression was induced by Isopropyl-beta-beta-D-thiogactopyranoside IPTGG. The purified recombinant N protein was used as the encapsulated antigen to establish a method for the detection of PDCoV N-ELISA antibody and to evaluate its specificity, sensitivity and stability. [results] SDS-PAGE electrophoresis showed that the expressed recombinant N protein mainly existed in soluble form. The recombinant protein expressed by Western blotting had the reaction activity. The N-ELISA established by the purified recombinant protein had good specificity. Sensitivity and stability. 148 sera from immunized pigs and 102 clinical sera were detected simultaneously with neutralization test. The positive coincidence rate of the two methods was 88.99 and the negative coincidence rate was 92.90, and the total coincidence rate was 91.20.The positive rate of the two methods was 66.67 by using the established ELISA method. [conclusion] the established swine Delta coronavirus N-ELISA anti-physical examination. The coincidence rate between the test method and the neutralization test is high. It can be used for PDCoV serum antibody detection and epidemiological investigation.
【作者單位】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015BAD12B02) 國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(No.2016YFD0500103)~~
【分類號(hào)】：S852.651

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本文編號(hào)：1690247