本文選題：ELISpot　切入點：口蹄疫　出處：《中國畜牧獸醫(yī)》2017年01期

【摘要】：豬口蹄疫免疫防御是控制豬口蹄疫疫情的重要手段,免疫水平指標通常用免疫抗體水平判定。對于其細胞免疫水平檢測尚缺乏成熟可靠的技術,本試驗利用市售ELISpot試劑盒建立豬口蹄疫特異γ干擾素檢測方法,刺激物分別采用疫苗全病毒顆粒(O/Mya98/XJ/2010)、口蹄疫病毒T細胞表位多肽池,以植物血凝素(PHA)為陽性對照,對細胞濃度、刺激物濃度、孵育時間等進行優(yōu)化。優(yōu)化條件為:外周血PBMC新鮮提取或凍存細胞成活率90%以上,最佳細胞數(shù)為2×105個/孔,最佳反應時間是16h,病毒粒子146S含量為100ng/mL,多肽最佳濃度10μg/mL,PHA的最佳濃度是20μg/mL。ELISpot技術檢測口蹄疫病毒感染豬γ干擾素方法的建立,為口蹄疫免疫力評價及口蹄疫疫苗免疫效果評估及進一步研究其與疫苗保護力(PD50)的相關性奠定基礎。
[Abstract]:The immune defense against foot-and-mouth disease in pigs is an important means to control the epidemic situation of swine foot-and-mouth disease. The immune level index is usually determined by the level of immune antibody. There is a lack of mature and reliable technology for the detection of cellular immunity level of swine foot-and-mouth disease. In this study, a ELISpot kit was used to establish a specific interferon 緯 assay for porcine foot-and-mouth disease (FMD). The stimulator was treated with whole virus particle O / Mya98 / XJ / 2010, FMDV T cell epitope polypeptide pool and phytohemagglutinin (PHAA) as positive control. The optimum conditions were as follows: the survival rate of fresh or frozen peripheral blood PBMC was more than 90%, and the optimum number of cells was 2 脳 105 / well. The optimum reaction time was 16h, the content of virus particles 146S was 100ng / mL, the optimum concentration of polypeptide was 10 渭 g / mL PHA, and the best concentration was 20 渭 g/mL.ELISpot technique to detect interferon 緯 (IFN- 緯) in pigs infected with foot-and-mouth disease virus (FMDV). It lays a foundation for evaluating the immunity of foot-and-mouth disease (FMD), evaluating the immune effect of FMD vaccine and further studying its correlation with vaccine protective ability (PD50).
【作者單位】： 大連市動物疫病預防控制中心;大連大學生命科學與技術學院;
【基金】：國家自然科學基金(81172777) 大連市科技計劃基金(2014B11NC096)
【分類號】：S852.4

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本文編號：1688710