本文選題：CCK-法　切入點：雞　出處：《黑龍江畜牧獸醫(yī)》2017年13期

【摘要】：為了研究應(yīng)用CCK-8法檢測雞淋巴細胞增殖的體外培養(yǎng)最佳條件,試驗設(shè)置了不同種板細胞數(shù)、血清濃度、培養(yǎng)時間、孵育時間和檢測波長等條件對其進行比較研究。結(jié)果表明:1 750 r/min轉(zhuǎn)速的改良雞外周血淋巴細胞分離方法效果最佳;在體外增殖培養(yǎng)試驗中,CCK-8加樣4 h后在450 nm波長處檢測OD值最理想,培養(yǎng)時間以44 h為最佳;在細胞數(shù)量一致的情況下,胎牛血清濃度為5%或者為10%差異不顯著(P0.05)。當細胞懸液濃度為1×10~6個/m L時,加入100,50,25,12.5μL不同細胞數(shù),4組間比較均差異顯著(P0.05),并且隨著細胞懸液濃度的增加OD值增加;最佳鋪板細胞的細胞懸液濃度為2.0×10~6~3.0×10~6個/m L,取50~100μL為宜,即最佳細胞鋪板數(shù)量控制在每孔1.5×10~5~2.0×10~5個/100μL。說明應(yīng)用CCK-8法檢測雞外周血淋巴細胞活性的最佳條件除種板細胞數(shù)不同外,在檢測波長、血清濃度、加樣后孵化時間等方面與其他動物試驗差別不大。
[Abstract]:In order to study the optimal conditions for the in vitro culture of chicken lymphocyte proliferation by CCK-8 assay, the number of different kinds of plate cells, the concentration of serum and the culture time were set up. The incubation time and detection wavelength were compared. The results showed that the improved method of separating peripheral blood lymphocytes at 1: 1 750 r/min speed was the best. In vitro proliferation culture test, the best OD value was detected at 450 nm wavelength after adding CCK-8 sample for 4 h, and the best culture time was 44 h, when the number of cells was the same, There was no significant difference in fetal bovine serum concentration of 5% or 10%. When the cell suspension concentration was 1 脳 10 ~ 6 / mL, there were significant differences among the four groups (P 0.05) when the cell suspension concentration was 1 脳 10 ~ 6 / mL, and the OD value increased with the increase of cell suspension concentration. The optimal cell suspension concentration was 2.0 脳 10 ~ (6) ~ 3.0 脳 10 ~ (-6) / mL, and 50 ~ 100 渭 L was chosen as the optimum cell layer, that is, the best cell layer number was 1.5 脳 10 ~ 5 ~ 2.0 脳 10 ~ 5 / 100 渭 L per well. The best condition for detecting the lymphocyte activity of chicken peripheral blood by CCK-8 method was different from the number of seed plate cells. The detection wavelength, serum concentration, incubation time after adding samples were not different from other animal tests.
【作者單位】： 溫州科技職業(yè)學院;浙江省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所;浙江省亞熱帶作物研究所;
【基金】：2015年浙江省新苗人才計劃項目(2015R458001) 浙江省教育廳高等學校訪問工程師校企合作項目(FG2014197) 浙江省重大優(yōu)先項目(2008C12044-3)
【分類號】：S831

【參考文獻】

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本文編號：1687686