本文選題：CDV　切入點：分子流行病學(xué)調(diào)查　出處：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：2015年6月至2016年6月,對山東省中東部地區(qū)送檢的118份病死水貂、貉子和狐貍肺臟病料檢測,水貂83份、貉子17份、狐貍18份。根據(jù)Genbank已發(fā)表犬瘟熱病毒(Canine distemper virus,CDV)N基因高度保守區(qū)域設(shè)計引物,建立了其RT-PCR檢測方法,陽性結(jié)果為71份、13份與13份,陽性率為85.54%、76.47%與72.22%。選取部分陽性病料經(jīng)MDCK細胞分離,貂源分離獲得4株CDV,貉源分離1株,狐源沒有分離得到,5株分離株分別命名為CDV103、CDV114、CDV122、CDVDH2與CDV LC2株。接種細胞后部分樣品呈現(xiàn)明顯CPE亦有部分樣品無明顯CPE,經(jīng)RT-PCR檢測分析發(fā)現(xiàn)部分無CPE細胞凍融液檢測結(jié)果呈陽性,表明CDV對MDCK細胞的適應(yīng)性有所不同。根據(jù)Genbank已發(fā)表的CDV F、H與N全基因序列分別設(shè)計擴增F、H與N全基因的特異性引物,研究CDV分子生物學(xué)特性。采用RT-PCR擴增及瓊脂凝膠回收、克隆,對克隆純化獲得的相關(guān)片段測序與分析。經(jīng)DNAstar軟件對分離株核苷酸與氨基酸序列分析,根據(jù)Genbank中已發(fā)表的犬瘟熱毒株作參考株,構(gòu)建遺傳進化樹分析。H基因核苷酸序列分析結(jié)果:CDV103、C DV114、CDV122、CDVDH2與CDVLC2株彼此同源性為90.7%-100.0%,CDVLC2與CDVDH2株的同源性最高100.0%,CDVLC2、CDVDH2株與CDV103、CDV114、CD V122株彼此間有相對較高同源性為90.7%-91.1%。H蛋白氨基酸序列潛在的N-聯(lián)糖基化位點分析結(jié)果:CDV103、CDV114與CDV122株糖基化位點均為9個;第309-311位糖基化位點為野毒株所獨有得,Asia-1型中部分毒株具有9個潛在N-聯(lián)糖基化位點,CDVDH2與CDVLC2毒株糖基化位點位7個,這與Convac弱毒疫苗株H蛋白氨基酸序列的糖基化位點一致。H基因遺傳進化樹分析結(jié)果:CDV103、CDV114與CDV122株屬于Asia-1型,與JN(08)(2009ChinaFJ810213fox)株有較近親緣關(guān)系;CD VDH2與CDVLC2分離株屬于America-1型,與Convac、Onderstepoort疫苗株關(guān)系較近。F基因核苷酸序列分析結(jié)果:CDV103、CDV114、CDV122、CDVDH2與CDVLC2株核苷酸序列同源性為90.3%-99.0%,CDV103、CDV114與CDV122株同Onderstepoort疫苗株同源性為90.4%-90.7%,CDVDH2、CDVLC2株與Onderstepoort疫苗株同源性最高為99.0%。Fsp推導(dǎo)氨基酸序列潛在N-聯(lián)糖基化位點分析結(jié)果:CDV103、CDV114與CDV122株均含有2個潛在的N-聯(lián)糖基化位點,位于第62位和108位,CDV103、CDV114與CDV122株糖基化位與Asia-1型毒株一致。F基因構(gòu)建遺傳進化樹分析結(jié)果:5株CDV劃分于2個基因型,CDV103、CDV114與CDV122株屬于Asia-1型,與ZYL(2016ChinaKX499865fox)株存在較近親緣關(guān)系;CDVDH2與CDVLC2株屬于America-1型,同Onderstepoort疫苗株關(guān)系較近。N基因核苷酸序列分析結(jié)果:CDV103、CDV114、CDV122、CDVDH2與CDVLC2株彼此間同源性均高于99.5%,為99.5%-100.0%,CDV103與CDV114株相似性最高為100.0%,CDVLC2與CDVDH2株同源性最低為99.5%。N蛋白氨基酸序列存在較高同源性,5株分離株彼此同源性為99.0%-100.0%。與Onderstepoort弱毒疫苗株相似性較高,為98.3%-98.9%;N基因遺傳進化樹分析結(jié)果:5株分離株與Onderstepoort疫苗株存在較近親緣關(guān)系,劃分于America-1型。本研究對山東省中東部地區(qū)毛皮動物犬瘟熱病毒流行病學(xué)調(diào)查,分離鑒定,主要基因測序,構(gòu)建遺傳進化發(fā)生樹。本研究主要克服犬瘟熱病毒分離困難的問題,總結(jié)犬瘟熱病毒分離過程中的經(jīng)驗。為做好犬瘟熱病毒防制和監(jiān)測等相關(guān)工作提供了重要的分子流行病學(xué)資料。為犬瘟熱病毒分子生物學(xué)提供了最新的調(diào)查數(shù)據(jù)。
[Abstract]:From June 2015 to June 2016, 118 copies of mink for inspection of Shandong Province in the eastern region, and the fox raccoon lung disease material detection, 83 copies of 17 copies of mink, raccoon, fox 18. According to the published Genbank of canine distemper virus (Canine distemper virus, CDV) N gene is highly conserved region primers were designed and established the RT-PCR detection methods, positive results for 71 copies, 13 copies and 13 copies, the positive rate was 85.54%, 76.47% and 72.22%. were part of a positive disease after MDCK cells were isolated, 4 strains of CDV isolated from mink source, 1 strains of raccoon dog, fox source is not isolated, 5 strains of isolates were named as CDV103 and CDV114. CDV122, CDVDH2 and CDV LC2 strains. After inoculation samples showed no obvious CPE is also part of the sample CPE, RT-PCR analysis found no CPE cell lysate was tested positive, showed that the adaptability of CDV on MDCK cells were different. According to the Genbank CDV: F, H and N were designed to amplify the gene sequence of F, specific primers H and N genes, characteristics of molecular biology of CDV. Amplified and cloned by RT-PCR agar gel recovery, purification, sequencing and analysis of related fragments obtained by DNAstar software. Cloning of isolates of nucleotide and amino acid sequence analysis according to the published Genbank, the canine distemper virus strains were reference strains, phylogenetic tree construction analysis of nucleotide sequences of.H gene: CDV103, C DV114, CDV122, CDVDH2 and CDVLC2 strains of each homology was 90.7%-100.0%, the highest homology of 100%, CDVLC2 and CDVDH2 CDVLC2 strain, CDVDH2 strain and CDV103, CDV114, CD among the V122 strains have a relatively high homology of amino acid sequence of 90.7%-91.1%.H protein N- potential glycosylation site analysis results: CDV103, CDV114 and CDV122 strains of glycosylation sites were 9; the 309-311 glycosylation sites Unique to wild strains of type Asia-1 strains have 9 potential glycosylation sites of N-, CDVDH2 and CDVLC2 strains of glycosylation site 7, which with Convac attenuated vaccine strain H protein amino acid sequence genetic glycosylation sites consistent.H gene phylogenetic analysis results: CDV103 and CDV114. CDV122 strains belonged to Asia-1 type, and JN (08) (2009ChinaFJ810213fox) strains have a close genetic relationship; CD VDH2 and CDVLC2 isolates belong to type America-1, Convac and Onderstepoort, the closer relationship between vaccine strain.F gene nucleotide sequence analysis results: CDV103, CDV114, CDV122, CDVDH2 and CDVLC2 strains of nucleotide sequence homology of 90.3%-99.0%. CDV103, CDV114 and CDV122 strains with Onderstepoort vaccine strain homology to 90.4%-90.7%, CDVDH2, CDVLC2 strain and Onderstepoort vaccine strain had the highest homology to the deduced amino acid sequence of 99.0%.Fsp N- potential glycosylation site analysis results: CDV103, CD V114 and CDV122 strains contained 2 potential N- linked glycosylation sites, located in sixty-second and 108, CDV103, construction of phylogenetic analysis results of glycosylation and the Asia-1 strain.F gene CDV114 and CDV122 strains, 5 CDV strains into 2 genotypes, CDV103, CDV114 and CDV122 strains belong to type Asia-1, and ZYL (2016ChinaKX499865fox) strains had a close genetic relationship; CDVDH2 and CDVLC2 belonged to America-1 type, with Onderstepoort vaccine strain is closely related to the.N gene nucleotide sequence analysis results: CDV103, CDV114, CDV122, CDVDH2 and CDVLC2 strains of each homology were higher than 99.5%, 99.5%-100.0%, CDV103 and CDV114 strain the highest is 100%, CDVLC2 and CDVDH2 were the lowest homology to the amino acid sequence of 99.5%.N protein has high homology, 5 isolates each homology was 99.0%-100.0%. and Onderstepoort attenuated vaccine strain of high similarity to 98.3%-98.9%; N Phylogenetic tree analysis results: 5 isolates and Onderstepoort vaccine strain has close relationship, divided in America-1. The research on the epidemiology of canine distemper virus fur animal in middle part of Shandong province mainly investigation, isolation and identification, gene sequencing, genetic construction of a phylogenetic tree. This research is mainly to overcome the difficulty in separation of canine distemper virus isolation of canine distemper virus, summarize the experience in the process. Provide important data for the molecular epidemiology of canine distemper virus prevention and monitoring and other related work. The molecular biology of canine distemper virus provides the latest survey data.

【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊應(yīng)麗;;犬瘟熱病毒研究進展[J];河北農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年04期

2 閆喜軍;柴秀麗;羅國良;王鳳雪;田宏宇;張海玲;易立;邵西群;;貉犬瘟熱病毒的分離與鑒定[J];特產(chǎn)研究;2006年04期

3 Pillet S;邱文英;;犬瘟熱病毒對被感染免疫細胞的細胞凋亡過程的選擇性抑制[J];中國畜牧獸醫(yī);2009年07期

4 金耀忠;朱苗紅;李義;;犬瘟熱病毒的分離與初步鑒定[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2009年06期

5 劉玉秀;高玉偉;李天松;王磊;于志君;李林;張釗偉;朱曉文;馮娜;黃耕;楊松濤;王鐵成;夏咸柱;;犬瘟熱病毒引起嚙齒類動物肥胖癥的機制研究進展[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2010年12期

6 耿志賢,田克恭,李鐘鐸;犬瘟熱病毒的分子生物學(xué)研究進展[J];中國獸醫(yī)雜志;1997年02期

7 郭愛珍,陸承平;犬瘟熱病毒細胞膜受體的鑒定[J];病毒學(xué)報;2000年02期

8 田克恭,遇秀玲,劉朗;免疫組化技術(shù)在犬瘟熱病毒檢測和鑒定中的應(yīng)用[J];中國獸醫(yī)雜志;2000年08期

9 喬軍,孟慶齡,陳瑛,何宏彬,夏咸柱;用半套式PCR檢測犬瘟熱病毒的研究[J];中國動物檢疫;2000年06期

10 劉偉;犬瘟熱病毒高壓滅活苗的研制[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2000年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 付少才;陳萬榮;劉樹玲;;抗犬瘟熱病毒單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用[A];第十一次全國養(yǎng)犬學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

2 陳萬榮;付少才;周珍輝;;散發(fā)性犬瘟熱病毒的分離與鑒定[A];全國獸醫(yī)外科學(xué)第13次學(xué)術(shù)研討會、小動物醫(yī)學(xué)第1次學(xué)術(shù)研討會暨奶牛疾病第3次學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2006年

3 夏永恒;楊兵;孫繼國;陳小玲;周宏專;張晉;;2007-2008年北京地區(qū)犬瘟熱病毒分子流行病學(xué)調(diào)查[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

4 莊金秋;梅建國;沈志強;;犬瘟熱病毒實驗室檢測方法研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第三次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

5 李智麗;王吉貴;孫佳增;王爽;袁道莉;伊寶;馬君;劉維全;;犬瘟熱病毒全長基因組克隆[A];全國動物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2012年

6 徐向明;崔治中;殷俊;楊玲;吳寶金;薛整風(fēng);李厚達;;犬瘟熱病毒中國分離株羹膜糖蛋白基因免疫小鼠誘發(fā)的抗體應(yīng)答[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（下）[C];2003年

7 畢振威;王永山;范紅結(jié);;分泌犬瘟熱病毒單克隆抗體雜交瘤細胞株的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會論文集[C];2012年

8 孫婧;畢振威;夏興霞;王曉麗;諸玉梅;董晨紅;賈紅;朱瑞良;王永山;;犬瘟熱病毒單克隆抗體夾心ELISA檢測方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

9 李天松;劉玉秀;王磊;王勝樂;高玉偉;王鐵成;馮娜;楊松濤;王化磊;王承宇;黃耕;趙永坤;夏咸柱;;犬瘟熱病毒感染模型建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會論文集[C];2012年

10 李金中;何洪彬;胡貴學(xué);范泉水;余春;鄭先春;黃耕;武銀蓮;夏咸柱;殷震;;熊貓犬瘟熱病毒的進化地位研究[A];生命科學(xué)與生物技術(shù)：中國科協(xié)第三屆青年學(xué)術(shù)年會論文集[C];1998年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 柏亞鐸;犬瘟熱病毒、犬冠狀病毒入侵宿主細胞機制研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

2 李天松;不同宿主來源犬瘟熱病毒遺傳分析與生物學(xué)特性研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 王君瑋;貂、狐、貉源犬瘟熱病毒分離鑒定與分子生物學(xué)特性研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

4 劉玉秀;犬瘟熱病毒敏感細胞系和感染性克隆的構(gòu)建與初步應(yīng)用研究[D];吉林大學(xué);2014年

5 鞠會艷;犬瘟熱病毒基因疫苗與重組犬腺病毒的構(gòu)建及其實驗免疫研究[D];吉林大學(xué);2006年

6 簡中友;犬瘟熱病毒N蛋白體外表達與診斷技術(shù)應(yīng)用研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

7 蘇鳳艷;水貂CDV的分離鑒定及其主要基因的克隆與免疫研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

8 徐向明;犬瘟熱病毒中國分離株囊膜糖蛋白基因序列比較及其DNA疫苗的免疫效力[D];揚州大學(xué);2003年

9 李維克;犬瘟熱病毒強毒株TM-CC反向遺傳系統(tǒng)及表達犬細小病毒VP2蛋白重組犬瘟熱弱毒株的構(gòu)建[D];東北林業(yè)大學(xué);2014年

10 馮娜;大熊貓犬瘟熱流行病學(xué)調(diào)查與實驗免疫研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孫彥剛;狐源犬瘟熱病毒SD(14)7分離株全基因組序列分析及致病性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 虞一聰;犬瘟熱病毒M、F、H基因重組桿狀病毒的構(gòu)建、鑒定與表達研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 潘奇?zhèn)?犬瘟熱病毒抗原膠體金免疫層析檢測方法的建立[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

4 戴秀美;毛皮動物犬瘟熱的流行情況及一株犬瘟熱病毒的生物學(xué)特性研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 肖婷;延邊流行株犬瘟熱病毒H基因的原核表達及間接ELISA方法的建立[D];延邊大學(xué);2016年

6 劉天宇;犬瘟熱病毒H基因與犬IL-6融合基因的克隆與原核表達[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

7 時紅星;犬瘟熱病毒的分離及單克隆抗體的研制[D];揚州大學(xué);2008年

8 宋爽;犬瘟熱病毒分離方法的比較研究[D];長春理工大學(xué);2009年

9 岳妙姝;犬瘟熱病毒熒光抗體的建立及初步應(yīng)用[D];長春理工大學(xué);2008年

10 孫瑋;犬瘟熱病毒單克隆抗體的制備、鑒定及初步應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2011年

，

本文編號：1686913