本文選題：脂代謝　切入點：肝細胞　出處：《吉林大學》2015年碩士論文

【摘要】：乳脂是牛奶中重要的營養(yǎng)物質，它的合成受到機體營養(yǎng)狀態(tài)和神經內分泌激素信號等一系列因素的調控。脂肪組織和肝臟是奶牛機體兩大脂代謝器官，對于維持機體能量平衡和脂質穩(wěn)態(tài)起著重要作用。催乳素（prolactin，PRL）是促進乳腺發(fā)育和啟動泌乳的重要激素，研究發(fā)現在泌乳期PRL能夠發(fā)揮“能量遷移”作用，將營養(yǎng)物質優(yōu)先供給乳腺，用于乳脂和乳蛋白的合成，糖皮質激素（glucocorticoid，GC）是下丘腦-垂體-腎上腺軸（hypothalamic pituitary adrenalaxis，HPA）上的重要激素，在機體內糖、脂肪和蛋白質的代謝中發(fā)揮調控作用，因此探究PRL和GC對脂肪組織和肝臟脂代謝的影響對于掌握乳脂合成調節(jié)機制具有重要的意義。 本研究通過體外分離培養(yǎng)奶牛前脂肪細胞，然后誘導分化為成熟脂肪細胞，并對細胞做初步鑒定，發(fā)現細胞分化過程中脂滴逐漸增加、甘油三酯（Triglyceride，TG）含量逐漸升高，大約在誘導13天后細胞內脂滴和TG含量維持相對恒定，脂肪細胞內脂合成相關轉錄因子過氧化物酶體增殖物激活受體γ2(peroxisome proliferator-activated receptor γ2, PPARγ2)和固醇調節(jié)原件結合蛋白(sterol regulatory element binding protein1c, SREBP-1c)的表達水平也隨著細胞的分化而升高，mRNA水平在分化第4天達到峰值，隨后開始降低，而蛋白表達水平和核分布量在分化第13天顯著高于分化0天；然后向分化成熟的脂肪細胞中添加PRL，探究PRL對脂肪細胞脂代謝的作用，結果顯示，PRL在催乳素受體（prolactin receptors，PRLR）介導下激活Janus激酶-信號轉導子和轉錄激活子（Janus kinase2-transcription factor signal transducer and activator oftranscription5，JAK2/STAT5)通路，使STAT5磷酸化增加，從而抑制脂肪細胞核轉錄因子SREBP-1c的表達和入核，然后進一步使下游脂合成相關基因的表達水平降低，而脂分解相關基因的表達水平升高，最終使脂肪細胞培養(yǎng)液中甘油含量升高，說明PRL能夠促進脂肪動員。 為了探究GC對奶牛脂肪細胞和肝細胞脂代謝的作用，本研究通過向體外培養(yǎng)的奶牛脂肪細胞和肝細胞中添加地塞米松（dexamethasone，DXM），利用實時熒光定量PCR（qRT-PCR），蛋白印記（Western blotting），免疫熒光（IF），酶聯免疫法（Elisa）等分子生物學手段檢測細胞內相關通路上關鍵蛋白及下游脂代謝相關基因的表達水平，結果顯示，DXM在奶牛脂肪細胞和肝細胞中均發(fā)揮促進脂合成的作用，在脂肪細胞中，DXM主要通過上調細胞糖皮質激素受體（glucocorticoid receptors，GR）的表達水平激活核轉錄因子SREBP-1c，從而使下游脂合成相關基因的表達水平升高，脂分解相關基因的表達水平降低，最終導致脂肪細胞培養(yǎng)液中甘油含量降低；在肝細胞中，DXM主要通過上調細胞GR的表達水平激活核轉錄因子SREBP-1c、碳水化合物反應元件結合蛋白（Carbohydrates response element binding protein, ChRBP）和過氧化物酶體增殖物激活受體α (peroxisome proliferator-activated receptor α, PPARα)，促進它們的表達和入核，從而使下游脂合成相關基因的表達水平升高，脂氧化相關基因的表達水平降低，最終使肝細胞中TG含量升高，DXM作用下肝細胞中載脂蛋白的表達水平也升高，，從而使肝細胞培養(yǎng)液中極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein,VLDL）含量升高，以上結果明DXM能夠促進肝細胞脂合成，增加肝細胞中TG的含量，并促進肝臟VLDL的組裝和分泌。
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【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S823

【參考文獻】

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本文編號：1682937